[发明专利]基于陆生环境DNA检测斑翅果蝇的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种根据斑翅果蝇基因组特异性DNA序列设计的引物对和Taqman荧光探针在制备基于陆生环境DNA检测斑翅果蝇的试剂盒中的应用，其特征在于，所述斑翅果蝇的基因组特异性DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述引物对包括BCGY4-F和BCGY4-R，所述BCGY4-F的DNA序列如SEQ ID NO.2所示，所述BCGY4-R的DNA序列如SEQ ID NO.3所示；所述Taqman荧光探针的DNA序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括缓冲试剂。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用的方法为：

S1、取果树样本在去离子水中震荡漂洗得到漂洗液；

S2、用卡默尔蠕动泵和直径47mm、孔径10um的Millipore聚碳酸酯蚀滤膜过滤所述漂洗液，使eDNA富集在所述聚碳酸酯蚀滤膜上；

S3、收集所述eDNA，用权利要求1或2中所述的试剂盒进行qPCR反应，根据实验组Cq值与NTC组Cq值的大小关系判断环境中是否含有斑翅果蝇；当实验组Cq值大于NTC组Cq值，说明环境中含有斑翅果蝇。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用还包括定量检测方法，具体为：

S4、提取斑翅果蝇的基因组DNA，测试所述基因组DNA初始浓度，将所述基因组DNA进行梯度稀释；

S5、用权利要求1或2中所述的试剂盒进行qPCR反应，根据不同浓度基因组DNA反应所得的Cq值与基因组DNA浓度建立标准曲线；

S6、将待测eDNA的Cq值代入所述标准曲线中进行计算，获得eDNA含量。