[发明专利]一种评估提取纯化方法亲疏水偏好性的方法

说明书

本发明公开了一种评估提取纯化方法亲疏水偏好性的方法，设置至少两组外源肽段标品，每组外源肽段标品至少包含三种不同亲疏水偏好性的肽段，并且每一组中每种肽段在另一组中均有序列一致，但是同位素标记不同的对应肽段；样品提取纯化处理中任一步骤可以加入外源肽段标品作为检测标品；最后一组外源肽段标品作为标定标品在样本提取完毕后加入，通过液相质谱检测；计算不同亲疏水偏好性肽段的得率比值，将其进行比对，比值减少明显的，即为某步骤处理后或者整体方法对该性质肽段的选择性较弱。本方法能够直观、定量评估样本提取纯化过程中的不同性质样本的损失情况，以及不同提取纯化实验方法对样本中不同极性物质分布比例的改变影响。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种评估分子提取纯化方法亲疏水偏好性的方法。

背景技术

随着检测技术的高速发展，各种组学技术，包括蛋白组、肽组、代谢组等都在快速发展。对于各种组学技术来说，合适的提取纯化方法，可以有效地减少其他物质的影响，充分的保留目标物质丰富性和分布状态。由于组学样本中存在一系列不同物质，且存在不同极性性质，如果提取方法存在亲疏水偏好性，则将造成非偏好性的物质大量丢失，而偏好性的物质高度富集，则目标样本的丰富性将减少，比例真实性也将失真。

目前，对于组学样本提取纯化的亲疏水性的评估大多基于经验来判断结果，没有一个合适的方法可以直观、定量进行评估。

发明内容

发明目的：为解决上述技术问题，本发明提供了一种评估提取纯化方法亲疏水偏好性的方法。

技术方案：一种评估提取纯化方法亲疏水偏好性的方法，包括以下步骤：

(1)设置至少两组外源肽段标品，每组外源肽段标品至少包含三种不同亲疏水偏好性的肽段，并且每一组中每种肽段在另一组中均有序列一致，但是同位素标记不同的对应肽段；

(2)样本提取纯化完毕后，加入一组外源肽段标品作为标定标品，通过液相质谱进行检测；其他组外源肽段标品作为检测标品，可在样品提取纯化处理中任一步骤加入；

(3)定量检测标品与标定标品，将检测标品的肽段丰度除以标定标品的肽段丰度，可以得到不同亲疏水偏好性肽段的得率比值，将其进行比对，比值减少明显的，即为某步骤处理后或者整体方法对该性质肽段的选择性较弱。

作为优选或具体的实施方式：

步骤(1)中，所述每组外源肽段标品至少包含三种不同亲疏水偏好性的肽段，其中所述三种不同亲疏水偏好性的肽段的比例在每组中均相同。

步骤(1)中，所述每组外源肽段检测标品至少包含三种不同亲疏水偏好性的肽段，其中所述不同亲疏水偏好性的肽段包括单独存在的肽段或者是肽段串联起来的以酶切位点为间隔的长肽段或蛋白，但是标定标品中必须包含不同亲疏水偏好性的单独存在的肽段。

步骤(1)中，所述每一组中每种肽段在另一组中均有序列一致，但是同位素标记不同的对应肽段，其中所述同位素标记不同包括：一组中肽段没有同位素标记，其他组中有同位素标记，但各组用以标记的同位素也不相同；或者各组中肽段都有同位素标记，但各组用以标记的同位素不相同。

步骤(2)中，所述标定标品加入量与样本的比例浓度和检测标品加入量与样本的比例浓度相同。

步骤(2)中，所述提取纯化处理涉及方法可以包括：萃取，沉淀，过滤或吸附等。

步骤(2)中，所述样本包括肽组、代谢组及能够被酶切为各种亲疏水肽段的蛋白质或蛋白质组。