[发明专利]一种水溶性发酵药物中微量黄曲霉毒素分析检测方法

说明书

本发明涉及一种水溶性发酵药物中微量黄曲霉毒素分析检测方法，其包括：(1)样品的水溶液，用二氯甲烷萃取，氮气吹干后再用30％甲醇水溶液(V/V)溶解获得供试品溶液；(2)采用超高效液相‑质谱联用法检测。本发明采用萃取方式解决了基质干扰目标峰测定及样品在仪器中残留引起仪器污染的问题；本发明黄曲霉毒素与样品在7min内实现全部有效分离，黄曲霉毒素在各自的线性范围内线性相关系数r均＞0.99，最低定量限为3ng/L，最低检测限为1ng/L，加标平均回收率均在80％～120％。本发明的检测方法具有快速、高效、灵敏度高、样品检测无基质干扰，耐用性好等特点，可适用于水溶性药物中黄曲霉毒素定量及定性检测。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，更具体的说，是涉及水溶性发酵药物中微量黄曲霉毒素分析检测方法

背景技术

黄曲霉毒素(AFLATOXIN，简称AFT)是黄曲霉菌和寄生曲霉菌新陈代谢的产物，是公认的最强烈的一种自然致癌物。这些菌株主要寄生在食用油、玉米、大米、花生米、干果、调味品、饲料及多种食品中，并产生毒素，可引起人和畜禽的中毒。黄曲霉毒素的化学结构已确定，包含黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)等10多种，其中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2结构如下：

发酵类药物所用的粮食类原材料含有黄曲霉菌或寄生曲霉菌寄生，可能产生黄曲霉毒素，各国药典要求限度控制在2μg/kg以下。黄曲霉毒素检测方法有薄层色谱法(TIC)、液相色谱法(HPLC)、酶联免疫法(ELISA)、荧光光度法(IAC/SFB)、超高效液相-质谱法(UPLC-MS)等，这些方法检测灵敏度较高(mg/kg级)，样品前处理方法繁琐，样品中基质干扰黄曲霉毒素测定等不足点。本方法采用超高效液相色谱进行分离，高选择性与高灵敏度质谱进行检测，检测灵敏度更高(μg/kg级)；样品采用溶解萃取方式，前处理简单，样品基质对目标峰测定无干扰；方法耐用性好，可以很好的检测样品中微量黄曲霉毒素的含量，以确保下游产品的产品质量。

发明内容

本申请的发明人发现，发酵药物所用到的粮食类原材料中有可能被黄曲霉毒素污染，为了实现对发酵药物中微量黄曲霉毒素质量控制，需要对发酵药物中微量黄曲霉毒素进行检测。

本发明的目的是提供一种水溶性发酵药物中微量黄曲霉毒素检测方法，该方法具有高选择性与高灵敏度、样品前处理简单，样品基质对目标峰测定无干扰，方法耐用性好等优点，具体方案如下：

一种检测水溶性发酵药物中微量黄曲霉毒素的方法，所述黄曲霉毒素包括黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2，其特征在于，所述方法包括：

步骤1：样品用水溶解后，用二氯甲烷萃取得萃取液，萃取液用氮气吹干，再用30％甲醇水溶液(V/V)溶解获得供试品溶液；

步骤2：采用超高效液相色谱-质谱联用仪对步骤1的供试品溶液进行检测；

其中，步骤2所述超高效液相色谱的色谱条件为：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

流动相：流动相A为10mM甲酸铵水溶液，流动相B为甲醇；流动相的梯度洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序如下表：

步骤2中所述超高效液相色谱-质谱联用仪为：超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪；

所述水溶性发酵药物选自阿卡波糖、1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸、L-赖氨酸和谷胱甘肽。