[发明专利]一种他汀类药物代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

本发明公开了一种他汀类药物代谢标志物的检测试剂盒，其中，所述试剂盒用于检测他汀类药物疗效相关基因SLCO1B1T521C和SLCO1B1A388G两个基因的多态性，试剂盒包括如下组分：SLCO1B1T521C扩增引物、SLCO1B1T521C测序引物、SLCO1B1A388G扩增引物、SLCO1B1A388G测序引物和阳性对照。本发明以多重RPA扩增和优化焦磷酸测序技术为组合对汀类药物不良反应相关的基因多态性进行检测，试剂盒可同时检测SLCO1B1(T521C)、SLCO1B1(A388G)基因多态性，为临床汀类药物个性化用药给出基因角度的建议。

技术领域

本发明涉及一种他汀类药物代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用，属于基因检测领域。

背景技术

根据我国流行病学调查，中国成人血脂异常总体患病率在2012年高达40.40％，较10年前呈大幅度上升，血清总胆固醇(TC)水平的升高将导致未来中国心血管病事件增加约920万。他汀类药物在ASCVD一级和二级预防中均能显著降低心血管事件风险，是防治此类疾病最为重要的药物，对抑制心脑血管疾病也有显著作用，但其不良反应具有明显的个体差异，在部分人群中，他汀类药物会引起肌肉毒性，严重者出现横纹肌溶解症。SLCO1B1*1b、*5、*15是常见的基因突变类型，其中*5、*15是他汀类药物主要不良反应“横纹肌溶解症”的独立决定因子。该突变基因携带者相比未突变者发生肌毒性的风险增加约20倍。服用他汀类药物前对该突变进行检测对发生肌毒性的预测和预防具有重要意义。

SLCO1B1基因521TC位点位于12号基因外显子5，TT型为野生型，TC型为突变杂合子，CC型为突变纯合子。研究者发现521TC基因型在普伐他汀升高肾移植受体的HDL-C的效果好于521TT，但521TC多态性对普伐他汀降低TC和LDL-C效果影响较小。研究发现SLCO1B1基因521TC显著影响辛伐他汀酸的药动学参数，CC基因型个体辛伐他汀酸的AUC分别较CT和TT基因型个体高120％和221％。SLCO1B1基因521T＞C可明显降低转运阿托伐他汀的能力。SLCO1B1 521T＞C的突变降低了OATP1B1的转运功能，388A＞G的突变不影响其转运功能，但是两位点突变构成的单倍体GGCC基因型可显著降低OATP1B1的转运功能

目前，对于基因多态性检测的方法有很多种，如直接测序法、芯片法、高分辨率熔解曲线法、等位基因特异性扩增法、taqman荧光探针法等。其中，测序法和芯片法，操作步骤繁琐，检测周期长，且扩增产物容易产生污染；高分辨率熔解曲线法步骤简单，特异性偏低，且对仪器设备的要求较高；等位基因特异性扩增法采用ARMS引物进行特异扩增，其引物设计难以最优化，检测条件要求严格。Taqman荧光探针法其试验成本高，对于多个基因的扩增通量不高。因此，需要建立一种简单、快速有效、价格低廉、特异性高的检测基因多态性的方法。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是以多重RPA扩增和焦磷酸测序技术为基础检测基因多态性，获得一种他汀类药物代谢标志物的检测试剂盒及方法及其检测方法和应用。

为实现上述发明目的之一，本发明采用的他汀类药物代谢标志物的检测试剂盒的技术方案如下：

本发明的检测试剂盒针对SLCO1B1(T521C)、SLCO1B1(A388G)两个基因的多态性设计特异性扩增引物和测序引物，所述试剂盒包括如下组分：扩增反应液、SLCO1B1(T521C)测序引物、SLCO1B1(A388G)测序引物、阳性对照。

优选地，所述设计特异性引物，如下表所示：

优选的，所述SLCO1B1(T521C)的特异性引物组序列如序列表SEQ ID NO:1～SEQID NO:2所示；所述SLCO1B1(A388G)的特异性引物组序列如序列表SEQ ID NO:3～SEQ IDNO:4所示。