[发明专利]一种可结合SARS-CoV-2病毒RBD蛋白的中和抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种可以特异性结合SARS‑CoV‑2病毒棘突蛋白(Spike，S蛋白)的受体结合域(Receptor Binding Domian,RBD)的单克隆抗体21336‑98，它的制备方法以及重链和轻链可变区的6个抗原决定簇序列(CDR)，该单克隆抗体由杂交瘤细胞株21336‑98分泌，可以特异性识别SARS‑Cov‑2病毒S蛋白，且可阻断S蛋白与其人类宿主受体蛋白ACE2的结合。制备该抗体的抗原为哺乳动物细胞表达的SARS‑CoV‑2病毒S蛋白受体结合域RBD蛋白，最终获得的抗体属于IgG2b亚型，编码其可变区的序列经基因克隆的方式获得,该抗体可以用于建立人体内针对SARS‑CoV‑2产生Spike蛋白的中和抗体效价。

技术领域

本发明涉及生物医学领域。更具体地，本发明涉及一种可特异性识别 SARS-CoV-2病毒的S蛋白受体结合区域RBD的单克隆抗体，该抗体可阻断S 蛋白与其人类宿主受体蛋白ACE2的结合，本发明的抗体可用于组装人体内针对 SARS-CoV-2产生的抗体的中和能力和效价，还可进一步开发为可缓解感染后症状的抗体制剂。

背景技术

接种疫苗后，人体的免疫系统将会产生针对抗原的抗体，而接种新冠病毒的灭活病毒疫苗、重组蛋白疫苗、腺病毒疫苗或核酸疫苗的目的是产生针对病毒蛋白的多种抗体，鉴于目前已了解的新冠病毒感染机制，针对RBD区域的抗体可能会起到重要的保护作用。中和抗体是在机体免疫细胞受到免疫原(或病原体) 刺激后，由体内浆细胞会分泌能与免疫原(或病原体)结合的免疫球蛋白(抗体)，其中部分抗体能与病原体结合，进而阻断病原体侵入机体发生感染，这部分抗体就是中和性抗体，它是一种能通过与病毒结合而使其失活的特殊抗体，但并非所有针对抗原产生的抗体均具有中和作用。

根据以往经验，中和性抗体占总抗体的1％。为了更好地监测感染率、群体免疫和保护性免疫，以及评价临床试验期间和大规模接种后的疫苗效力，需要一种能检测SARS-CoV-2中和抗体的检测方法。检测中和抗体的常规方法要求在生物安全三级防护实验室里处理SARS-CoV-2活病毒，需要2-4天才能完成。利用假病毒的病毒中和试验作为一种替代方案可以在生物安全二级实验室内操作，但仍需使用活病毒和细胞培养过程，难以进行大样本测试，周期长，成本高。

利用重组的病毒棘突蛋白受体结合域-Fc融合蛋白和重组的人ACE2受体蛋白，可以在酶联免疫吸附试验板上模拟病毒蛋白与受体的结合作用，该作用可以被患者血清中的特异性中和抗体所抑制，这种方式类似于真实病毒或基于假病毒的中和试验原理，利用竞争性中和抗体可以实现对人血清中针对RBD的中和抗体的滴度进行评价。申请号为CN202110344480的发明专利“一种高灵敏SARS -CoV-2中和抗体的检测方法、检测试剂盒”公开了通过提前捕获非中和抗体，增强夹心法检测中和抗体的特异性。从而实现SARS-CoV-2中和抗体的检测的方法。发明专利“SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒”(CN202010560947)公开了一种采用竞争法联合磁微粒化学发光技术以及胶体金层析式竞争法的原理，以化学发光免疫分析仪或胶体金试纸条方式检测中和抗体的方法。上述发明均采用定性检测方法，无法对中和抗体的含量或效价给出明确、清晰的评价。

除疫苗研究外，来自26个国家的234个公司或机构在开发针对新冠病毒感染的164个抗体药项目，其中54个项目已达到临床阶段。这些抗体候选药物中，已有三款直接针对新冠病毒感染的中和抗体药物获得紧急使用授权，包括礼来生物的中和抗体Bamlanivimab(LY-CoV555)单独疗法，联合疗法——Bamlanivimab (LY-CoV555)700mg和etesevimab(JS016或LY-CoV016)1400mg，葛兰素史克新冠抗体药物Sotrovimab(VIR-7831，S309)。三款中和抗体均为针对 SARS-CoV-2刺突蛋白的强效、中和性单克隆抗体。