[发明专利]融合蛋白

权利要求书

1.基于G蛋白偶联受体构建的荧光探针，所述荧光探针是对G蛋白偶联受体进行改造获得的融合蛋白，所述改造包括在G蛋白偶联受体的第五跨膜区和第六跨膜区之间的第三胞内环中插入循环重排的萤光素酶；其中

所述G蛋白偶联受体是与特异性配体特异性结合的G蛋白偶联受体；

所述基于G蛋白偶联受体构建的荧光探针能够在细胞膜上表达；并且

所述基于G蛋白偶联受体构建的荧光探针当与所述G蛋白偶联受体的特异性配体接触时可以与其结合，由此导致荧光探针的荧光强度具有可检测到的变化。

2.权利要求1的荧光探针，其中所述改造包括对G蛋白偶联受体的第五跨膜区和第六跨膜区之间的第三胞内环截短并在截短的位置插入循环重排的萤光素酶。

3.权利要求2的荧光探针，其中所述循环重排的萤光素酶两端分别通过连接肽与G蛋白偶联受体的第三胞内环相连。

4.权利要求3的荧光探针，其中所述连接肽包括柔性氨基酸。

5.权利要求4的荧光探针，其中所述柔性氨基酸包括甘氨酸和/或丙氨酸。

6.权利要求5的荧光探针，其中所述连接肽由甘氨酸和丙氨酸组成。

7.权利要求6的荧光探针，其中所述循环重排的萤光素酶N端的连接肽为GG，和/或循环重排的萤光素酶C端的连接肽为GGAAA。

8.权利要求1的荧光探针，其中所述特异性配体是神经递质、激素、代谢分子、营养分子、或人工合成的激活特定受体的小分子或药物；所述G蛋白偶联受体是与神经递质、激素、代谢分子、营养分子、或人工合成的激活特定受体的小分子或药物特异性结合的G蛋白偶联受体。

9.权利要求8的荧光探针，其中所述神经递质是肾上腺素、去甲肾上腺素、乙酰胆碱、五羟色胺和/或多巴胺。

10.权利要求8的荧光探针，其中所述人工合成的激活特定受体的小分子或药物是异丙肾上腺素(ISO)。

11.权利要求1的荧光探针，其中所述G蛋白偶联受体是人源的或动物源的。

12.权利要求1的荧光探针，其中基于G蛋白偶联受体构建的荧光探针是用于检测肾上腺素的荧光探针，其中所述G蛋白偶联受体是特异性结合肾上腺素的GPCR。

13.权利要求12的荧光探针，其中所述特异性结合肾上腺素的GPCR是人β2肾上腺素受体，所述基于G蛋白偶联受体构建的荧光探针是基于人β2肾上腺素受体构建的荧光探针。

14.权利要求13的荧光探针，其中循环重排的萤光素酶通过N端和C端的连接肽与人β2肾上腺素受体的第三胞内环相连。

15.权利要求14的荧光探针，其中循环重排的萤光素酶两端的连接肽的长度分别是氮端为1个或2个氨基酸，和/或碳端为1个、2个、3个、4个或5个氨基酸。

16.权利要求15的荧光探针，其中循环重排的萤光素酶两端的连接肽的长度分别是氮端为2个氨基酸，碳端为5个氨基酸。

17.权利要求16的荧光探针，其中循环重排的萤光素酶两端的连接肽分别是N端为GG，C端为GGAAA，或者循环重排的萤光素酶两端的连接肽分别是N端为GG，C端为SPSVA，或者循环重排的萤光素酶两端的连接肽分别是N端为GG，C端为APSVA。

18.权利要求15的荧光探针，其中循环重排的萤光素酶两端的连接肽的长度分别是氮端为1个氨基酸，碳端为1个氨基酸。