[发明专利]D-乳酸脱氢酶SaDLD及其编码基因和应用

说明书

本发明公开了D‑乳酸脱氢酶SaDLD及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质，来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，是一种D‑乳酸脱氢酶，命名为SaDLD蛋白，是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明还保护SaDLD蛋白作为D‑乳酸脱氢酶的应用。本发明在相关医药、食品、化妆品等领域，具有重大的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉D-乳酸脱氢酶SaDLD及其编码基因和应用。

背景技术

D-乳酸脱氢酶(D-Lactate Dehydrogenase，DLD，EC 1.1.1.28)可以催化丙酮酸转化为乳酸，而乳酸是一种有价值的有机酸，广泛应用于食品、医药、化妆品、化工等行业。近年来，人们对乳酸用作单体合成聚合物聚乳酸(PLA)越来越感兴趣，因为聚乳酸是一种可生物降解和环境友好的石化衍生塑料替代品。此外，D-乳酸脱氢酶还可用于诊断生物传感器，以确定尿或血清中D-乳酸浓度升高相关的疾病类型，因为乳酸测定在临床诊断中至关重要，血乳酸浓度升高可导致多器官衰竭和感染性休克患者死亡。

人们对微生物来源的D-乳酸脱氢酶有了较多研究。到目前为止，已报道的产D-乳酸脱氢酶的微生物有凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、斯氏假单胞菌(Pseudomonasstutzeri)、孢子乳杆菌(Sporolactobacillus laevolacticus)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)、棒状乳杆菌(Lactobacillus coryniformis)、乳酸杆菌(Lactobacillussp.)、葡萄球菌(Staphylococcus sp.)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、詹森乳杆菌(Lactobacillus jensenii)和海栖热袍菌(Thermotoga maritima)等。但从盐螺旋菌属(Salinispirillum sp.)微生物来源的D-乳酸脱氢酶未见有报道。

发明内容

本发明的目的是提供D-乳酸脱氢酶SaDLD及其编码基因和应用。

本发明提供的蛋白质，来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，是一种D-乳酸脱氢酶，命名为SaDLD蛋白，氨基酸序列由序列表中序列1所示。由于氨基酸序列的特殊性，任何含有序列表中序列1所示氨基酸序列的肽蛋白的片段或其突变体，只要其与前述氨基酸序列具有99％以上同源性，且具有D-乳酸脱氢酶功能，均属于本发明保护范围。具体的，所述改变包括氨基酸序列中一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加和/或替换。

SaDL蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围。

优选的，所述基因的碱基序列如序列表中序列2所示，该基因序列来源于盐螺旋菌JH(Salinispirillum sp.JH)，由993个碱基组成。由于核苷酸序列的特殊性，任何序列表中序列2所示多核苷酸的变体，只要其与该多核苷酸具有90％以上同源性，均属于本发明保护范围之列。所述多核苷酸的变体是指一种具有一个或多个核苷酸改变的多核苷酸序列。此多核苷酸的变体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。

含有所述基因的重组表达载体、表达盒或重组微生物均属于本发明的保护范围。

本发明还保护SaDLD蛋白作为D-乳酸脱氢酶的应用。应用SaDLD蛋白作为D-乳酸脱氢酶时，采用的温度为20-60℃，采用的pH为4-8。应用SaDLD蛋白作为D-乳酸脱氢酶时，采用的温度为40℃，采用的pH为6。

本发明提供的D-乳酸脱氢酶SaDLD具有较高的酶活力和热稳定性，并且对金属离子具有高耐受性。