[发明专利]尼帕病毒受体结合糖蛋白及其应用

说明书

本发明涉及生物医药领域，特别涉及尼帕病毒受体结合糖蛋白及其应用。本发明以尼帕病毒受体结合糖蛋白(G)为研究对象，利用哺乳动物细胞对其进行可溶性表达，纯化并通过免疫小鼠制备特异性血清，并通过间接ELISA鉴定结合活性。结果表明：尼帕病毒G蛋白在Expi293F细胞中获得可溶性表达，纯化得到的目的蛋白大小正确，纯度大于99％；制备的抗血清能特异性结合目的蛋白。上述研究为尼帕病毒诊断与疫苗研究奠定了基础。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及尼帕病毒受体结合糖蛋白及其应用。

背景技术

尼帕病毒病是一种由尼帕病毒(NipahVirus)引起的主要侵害中枢神经系统和呼吸系统的急性损伤，且高度致死的人兽共患传染病，该病首次1998年暴发于马来西亚，其病原为尼帕病毒(Nipahvirus,NiV)，由于该病毒在尼帕双溪(Sungai Nipah)地区被分离到，因此得名。

尼帕病毒为单股负链RNA病毒，属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)亨尼帕病毒属(Henipavirus)成员，与另一个1994年在澳大利亚布里斯班发现的享德拉病毒(HendraVirus，HeV)同属。由于对人致死率高(40％-70％)，被列为生物安全4级病原。该病毒的主要自然宿主为狐蝠科(Pteropid)的果蝠(Fruitbat)，猪、牛、马、山羊、猫、狗、鼠、兔、狐狸、掠鸟、八哥等也是尼帕病毒的天然宿主。果蝠活动范围较广，NiV有可能在一定区域内的果蝠中相互传播，因此，相同种类蝙蝠分布的国家和地区会面临病毒突变、疫病暴发流行的危险，自1998年首次发现NiV以来，NiV的流行主要分布在东南亚地区和西太平洋地区。但近几年，西太平洋地区NiV暴发的频率逐渐降低，而东南亚地区国家，尤其是孟加拉国地区NiV暴发非常频繁，更引起了全世界的关注，NiV在此类周边国家的流行态势对我国造成了潜在威胁。我国目前尚未检出NiV，但我国东南沿海地区和云南地区具有适合NiV流行的生态环境和宿主动物，且已发现NiV的自然宿主，在蝙蝠体内存在尼帕病毒抗体，提示我国存在尼帕病毒或者类似病毒的自然疫源地。因此，开展针对NiV综合防控关键技术的相关研究，具有重要的现实意义。

NiV病毒粒子具有多形性，有囊膜，病毒颗粒大多数呈现不规则的球状，直径大多数长约150-200nm，少数病毒颗粒呈现丝状体，长度可达10000nm。NiV主要有2个遗传谱系：NiV马来西亚株(NiV Malaysia,NiV-MY)和NiV孟加拉株(NiVBangladesh,NiV-BD)。其中NiV-MY株基因组18246个核苷酸，而NiV-BD株基因组18252个核苷酸。目前流行毒株主要是马来西亚株，比同属HeV多12个碱基，编码N(核蛋白)、P(磷蛋白)、M(基质蛋白)、F(融合蛋白)、G(受体结合蛋白)、L(聚合酶)等至少6种蛋白，其中N蛋白、P蛋白、L聚合酶一起称为复制复合体，结合在病毒RNA上，与病毒基因组的转录和复制有关，M蛋白参与维持病毒囊膜形态，F蛋白、G蛋白参与蛋白的融合和吸附，与病毒入侵有关。NiV在其包膜内包含两种膜锚定糖蛋白，G蛋白和F蛋白，其中G蛋白与宿主细胞膜蛋白ephrin-B2、ephrin-B3结合，而此两种蛋白在宿主细胞表面高度保守，所以目前F、G为抗病毒与疫苗研究的主要靶点，NiV G蛋白全长共602个氨基酸，属于II型跨膜糖蛋白，N末端位于膜内，膜内部分极短，疏水的跨膜结构域靠近N端，C末端位于膜外，由一个“球型”头部区域和较长的“外茎”区域组成。

因此，提供可在哺乳动物细胞中可溶性表达纯化尼帕病毒受体结合糖蛋白具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了尼帕病毒受体结合糖蛋白及其应用。本发明以尼帕病毒受体结合糖蛋白(sG)为研究对象，利用哺乳动物细胞对其进行可溶性表达，纯化并通过免疫小鼠制备特异性血清，以期为后续开展尼帕病毒的蛋白结构、入侵机制、诊断、疫苗及中和抗体等相关研究奠定基础。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：