[发明专利]一种以奇异源四倍体百合作父本获得远缘杂交后代的胚培养方法

权利要求书

1.一种以奇异源四倍体百合作父本获得远缘杂交后代的胚培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）以奇异源四倍体百合‘Honesty’作父本与LA系三倍体、四倍体或A系二倍体、四倍体百合杂交，采集杂交授粉后40d~50d的蒴果，置于0℃~4℃打破休眠后，对蒴果进行消毒，取出胚珠作为胚珠外植体备用；

（2）将无菌纱布铺设于培养皿中，然后将步骤（1）得到的胚珠外植体置于纱布上，并倒入液体诱导培养基，使培养基没入胚珠外植体不超过1/3，进行连续黑暗培养，培养温度为25±2℃，促进所述胚珠外植体萌发，培养7~10d后添加液体培养基使纱布保持湿润，得到幼胚萌发试管苗；

（3）将步骤（2）得到的长度大于2cm的幼胚萌发试管苗转接于固体生根培养基进行光照培养，培养温度为25±2℃，光照强度为40~60μmol·m^-2·s^-1，光照时间为15~17h，促进试管苗生根，得到生根试管苗；

（4）将步骤（3）得到的根长2~4 cm的生根试管苗接种于增殖培养基进行光照培养，培养温度为25±2℃，光照强度为40~60μmol·m^-2·s^-1，光照时间为15~17h，获得每个杂交后代增殖的试管苗；

（5）将步骤（4）得到的增殖2~3倍的试管苗接种于成球培养基进行暗培养，培养温度为25±2℃，促进杂交后代发育为鳞球；其中，步骤（2）中的所述液体诱导培养基配方为：1/2MS培养基+6-BA 0.08~0.12 mg/L+NAA 0.04~0.06 mg/L+蔗糖38~32g/L+水解酪蛋白480~520mg/L，pH 5.6~6.0；步骤（3）中，所述固体生根培养基配方为：1/2MS培养基+NAA 0.1~0.3mg/L+蔗糖28~32g/L+活性炭0.6~0.9g/L+琼脂6~8 g/L，pH 5.6~6.0；所述增殖培养基的配方为：MS培养基+6-BA 0.04~0.06 mg/L+NAA 0.08~0.12 mg/L+蔗糖28~32g/L+琼脂6~8 g/L，pH 5.6~6.0；所述成球培养基的配方为：MS培养基+蔗糖35~45g/L+活性炭0.6~0.9g/L+琼脂6~8 g/L，pH 5.6~6.0。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，消毒方法为将蒴果接种于体积比浓度为70%~75%的乙醇水溶液中进行30~40秒表面处理，然后在体积比浓度为10%的次氯酸钠溶液中进行15~20分钟的杀菌处理，再用无菌水冲洗5~8次，完成所述蒴果的消毒灭菌处理。