[发明专利]一种检测透明质酸中乙二胺四乙酸二钠残留含量的方法在审
| 申请号： | 202110670021.4 | 申请日： | 2021-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN113390996A | 公开（公告）日： | 2021-09-14 |
| 发明（设计）人： | 刘宝珍;刘颖洁;王朋田;朱伟伟;刘守垒;王增利;刘云刚;王海泉;秦会利;吴建伟 | 申请（专利权）人： | 山东众山生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 牛芳 |
| 地址： | 276807 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 透明 质酸中乙二胺四 乙酸 残留 含量 方法 | ||
1.一种检测透明质酸中EDTA-2Na含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）准确称取透明质酸钠样品，加入透明质酸酶进行反应，获得酶解液；
（2）酶解液中加入三氯化铁溶液衍生化后进行高效液相色谱测定；
所述透明质酸酶选自内切透明质酸氨基葡糖苷酶或内切透明质酸葡糖醛酸酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透明质酸酶选自动物睾丸来源的透明质酸酶、蜂毒来源的透明质酸酶、溶酶体来源的透明质酸酶、水蛭来源的透明质酸酶或重组水蛭透明质酸酶。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透明质酸酶加入量为5000-40000IU/g。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解的温度为35-50℃，pH为6.0~8.0；酶解终点为0.5%w/v溶液的运动粘度不大于50mm2/s。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱条件如下：
色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，4.65mm×250mm，5µm；柱温：20-30 ℃；
流动相：A:B=80:20v/v，A为0.02mol/L四正丁基溴化铵-0.03mol/L乙酸钠，pH 3.0，B为甲醇；
流速：1.0mL/min；
检测波长：266nm；
进样量：10-20 µL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透明酸钠样品中透明质酸钠的含量为95%-105%wt，分子量为5kDa-2300kDa。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透明质酸钠可替换为透明质酸、透明质酸钾。
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