[发明专利]基于代谢组学的芪参颗粒治疗慢性心力衰竭的药代动力学-药效动力学分析方法

权利要求书

1.一种基于代谢组学的芪参颗粒治疗慢性心力衰竭的药代动力学-药效动力学分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

以芪参颗粒中14种主要药效成分为PK指标，20种特征代谢标记物以及B型利钠肽为PD指标，对基于代谢组学的芪参颗粒治疗慢性心力衰竭的药代动力学和药效学数据进行分析评价；

14种主要药效成分如下：

丹参酮I、二氢丹参酮I、隐丹参酮、芒柄花素、毛蕊异黄酮、绿原酸、毛蕊花糖苷、甘草酸、甘草次酸、甘草素、异甘草素、甘草苷、异甘草苷、芹糖甘草苷；

20种特征代谢标记物如下：

2-甲基马尿酸、L-酪氨酸、黄嘌呤酸、吲哚-3-乳酸、犬尿喹啉酸、L-苯丙氨酸、苯乙酰甘氨酸、癸二酸、L-色氨酸、3-吲哚乙酸、3-吲哚丙酸、马尿酸、犬尿氨酸、鹅去氧胆酸、胆酸、石胆酸、脱氧胆酸、十四碳二元酸、辛二酸、吲哚-3-羧酸。

2.根据权利要求1所述的基于代谢组学的芪参颗粒治疗慢性心力衰竭的药代动力学-药效动力学分析方法，其特征在于，其一种具体实施方式为：

步骤1、制备大鼠CHF模型；

步骤2、给与芪参颗粒药液，连续两周，于末次给药后采集不同时间段的眼眶全血，放入含有肝素钠离心管中，混匀后离心，吸取上层血浆，分装后备用；

步骤3、B型利钠肽含量测定

取大鼠血液于含有肝素钠离心管中，离心得到大鼠血浆，使用BNPELISA试剂盒定量分析不同时间段眼眶采集血浆中BNP含量；

步骤4、样品制备

将步骤2得到的血浆样品室温溶解后，加入内标溶液，混匀后加入乙腈和甲醇震荡摇匀；离心，吸取上清，氮气吹干；接着加入乙腈-水溶液，震荡溶解，离心，吸取上清液；

步骤5、利用UHPLC-TQ-MS/MS系统在MRM模式下定量分析步骤4样品的芪参颗粒中14种主要药效成分和20种特征代谢标记物，应用PKSolver计算14种主要药效成分的PK参数并绘制药-时曲线；

步骤6、数据统计采用Graphpad Prism5软件，组间差异比较采用单因素方差分析方法；

步骤7、应用Phoenix WinNonlin6.0软件对芪参颗粒治疗慢性心力衰竭的药代动力学和药效学数据进行分析评价。

3.根据权利要求1或2所述的基于代谢组学的芪参颗粒治疗慢性心力衰竭的药代动力学-药效动力学分析方法，其特征在于，所述芪参颗粒是由下述质量比的原料组成：丹参125g、黄芪125g、金银花75g、玄参75g、甘草50g和附子50g。

4.根据权利要求2所述的基于代谢组学的芪参颗粒治疗慢性心力衰竭的药代动力学-药效动力学分析方法，其特征在于，步骤2中采集眼眶全血的时间段分别为：末次给药后，0、0.08、0.25、0.50、1、1.5、2、4、6、8、12、24h。

5.根据权利要求2所述的基于代谢组学的芪参颗粒治疗慢性心力衰竭的药代动力学-药效动力学分析方法，其特征在于，步骤3中使用BNPELISA试剂盒定量分析0、0.08、0.25、0.50、1、1.5、2、4、6、8、12、24h眼眶采集血浆中BNP含量。

6.根据权利要求2所述的基于代谢组学的芪参颗粒治疗慢性心力衰竭的药代动力学-药效动力学分析方法，其特征在于，步骤4具体包括以下步骤：

将步骤2得到的血浆样品室温溶解后，100μL血浆中加入10μL内标溶液，混匀后加入200μL乙腈和200μL甲醇震荡摇匀20min；14000rpm离心10min，吸取上清，氮气吹干；接着加入100μL50％乙腈-水溶液，震荡溶解，14000rpm离心10min，吸取上清液置于套管中。

7.根据权利要求2所述的基于代谢组学的芪参颗粒治疗慢性心力衰竭的药代动力学-药效动力学分析方法，其特征在于，步骤5中PK参数包括T_1/2、T_max、C_max、AUC_0-t和AUC_0-∞。