[发明专利]RNA快速建库方法及其应用

权利要求书

1.一种RNA快速建库方法，其特征在于其步骤包括：

(1)提取样本中的total RNA，采用逆转录阻碍探针法去除rRNA，同时逆转录获得一端带有P7序列的cDNA；

(2)对多余的随机引物进行消解处理；

(3)对cDNA进行多聚腺苷酸化，在cDNA的3’端加上polyA，采用带有3’突出末端的双链DNA接头，在cDNA的另一端接上P5序列；

(4)文库扩增及回收。

2.根据权利要求1所述的RNA快速建库方法，其特征在于：步骤(1)中使用的逆转录引物的5’端带有P7序列和识别细胞的独立标识DNA序列。

3.根据权利要求2所述的RNA快速建库方法，其特征在于：步骤(3)中双链DNA接头的3’突出末端为一段多聚胸腺嘧啶的单链DNA序列，与cDNA的多聚腺苷酸配对。

4.根据权利要求3所述的RNA快速建库方法，其特征在于：步骤(3)中多聚胸腺嘧啶的数量为10-15个，polyA的数量与之匹配。

5.根据权利要求1所述的RNA快速建库方法，其特征在于：步骤(2)中消解处理使用的酶为T4 DNA聚合酶、Exonuclease I、Exonuclease T的一种或多种。

6.根据权利要求5所述的RNA快速建库方法，其特征在于：步骤(2)中消解处理的温度为37℃，时间为10-60分钟。

7.根据权利要求1所述的RNA快速建库方法，其特征在于：步骤(3)中多聚腺苷酸化和接头连接同时进行，采用的酶混合物包括TdT，还包括T4 DNA连接酶、Taq DNA连接酶或E.coliDNA连接酶的一种或多种。

8.根据权利要求1所述的RNA快速建库方法，其特征在于：步骤(1)中逆转录引物序列为：ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT+细胞识别序列+NNNNNNNN；

步骤(3)中的接头序列为：F：/5Phos/分子识别标志+ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT/NH2C6/；

R：AGATCGGAAGAGCGTCGTGTAGGGAAAGAGTGT

+分子识别标志+poly(dT)/NH2C6/，其中poly(dT)的数量为10-15个。

9.根据权利要求8所述的RNA快速建库方法，其特征在于：步骤(3)中反应温度为37℃，时间为10-30分钟。

10.权利要求1-9中任一项所述的RNA快速建库方法在单细胞转录组测序中的应用。