[发明专利]血清LRG1蛋白在制备肝内胆管癌淋巴结诊断试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及血清LRG1蛋白在制备肝内胆管癌淋巴结转移诊断试剂盒中的应用。本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了血清LRG1蛋白作为肝内胆管癌病人血清淋巴结转移诊断标志物的新用途，可采用基于TMT标记的定量蛋白质组学技术，根据体内血清蛋白质组学数据对肝内胆管癌病人进行全面系统的研究，该标志物经过ELISA验证，结果更为可靠，可为临床应用提供有价值的信息。

(一)技术领域

本发明涉及血清LRG1蛋白在制备肝内胆管癌淋巴结转移诊断试剂 盒中的应用。

(二)背景技术

肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC)起源于肝内胆管 上皮细胞的恶性转化，是第二位常见的肝内恶性肿瘤，占原发性肝脏恶性 肿瘤的5-15％。近年来，ICC发病率在全世界范围内不断增加，其侵袭能 力强、恶性程度高、预后差。淋巴结转移是肝内胆管癌分期和预后的重要 因素，明确淋巴结转移状态对精准分期、预后判断及术后辅助治疗决策具 有重要意义。

富含亮氨酸的α-2-糖蛋白(leucine-richalpha-2-glycoprotein，LRG) 为富含亮氨酸重复序列家族中最早发现的成员，包含8个富亮氨酸重复 序列(leucine-richrepeat，LRR)，每个LRR长度多为20～30个氨基 酸残基。LRG1可以与TGFβRⅡ/ALK1形成LRG1-ALK1-TGFβRⅡ -ENG复合物，该复合物会激活下游Smad1/5/8通路，发挥促进内皮细胞的迁移及血管生成的作用，因此LRG1表达水平的改变对肿瘤发生发展及 其生物学行为有重要影响。其在胃癌、结肠癌、胰腺癌等疾病进展中具有 重要意义，但血清LRG1在肝内胆管癌淋巴结转移诊断方面目前尚无报 道。

(三)发明内容

本发明是对LRG1能否作为肝内胆管癌淋巴结诊断标志物进行研究， 提供血清LRG1蛋白在肝内胆管癌淋巴结转移诊断中的应用。

本发明采用的技术方案是：

血清LRG1蛋白在制备肝内胆管癌淋巴结诊断试剂盒中的应用。本发 明利用TMT结合质谱技术检测肝内胆管癌病人术前血清，发现生物标志 物LRG1蛋白在肝内胆管癌淋巴结转移病人术前血清中浓度明显高于未 发生淋巴结转移病人的血清浓度，经ELISA验证表明LRG1蛋白在肝内 胆管癌淋巴结转移病人血清中浓度明显高于未发生淋巴结病人、且其血清 浓度与淋巴结转移阳性数目和阳性比呈正相关。

所述LRG1蛋白序列如下：

MSSWSRQRPKSPGGIQPHVSRTLFLLLLLAASAWGVTLSPKDCQ VFRSDHGSSISCQPPAEIPGYLPADTVHLAVEFFNLTHLPANLLQGASK LQELHLSSNGLESLSPEFLRPVPQLRVLDLTRNALTGLPPGLFQASATLDTLVLKENQLEVLEVSWLHGLKALGHLDLSGNRLRKLPPGLLANFTL LRTLDLGENQLETLPPDLLRGPLQLERLHLEGNKLQVLGKDLLLPQPD LRYLFLNGNKLARVAAGAFQGLRQLDMLDLSNNSLASVPEGLWASL GQPNWDMRDGFDISGNPWICDQNLSDLYRWLQAQKDKMFSQNDTR CAGPEAVKGQTLLAVAKSQ

优选的，所述试剂盒为诊断肝内胆管癌淋巴转移的试剂盒。

具体的，所述试剂盒可为检测LRG1蛋白浓度的TMT试剂盒或 ELISA试剂盒。

TMT技术是一种多肽体外标记技术，该技术采用10种同位素的标签， 特异性标记多肽的氨基基团，经过串联质谱LC-MS/MS分析，可同时比 较10组不同样品中蛋白质的相对含量。

本发明中用于检测LRG1蛋白的TMT试剂盒具体组成如下：

TMT¹⁰ 126label reagent，2×0.8mg