[发明专利]Leptin受体亲和肽及其应用

说明书

本发明公开了一种Leptin受体亲和肽及其应用。所述Leptin受体亲和肽的序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了一种具有胶原结合能力的亲和肽，其包括所述Leptin受体亲和肽和具有胶原特异结合能力的短肽，该具有胶原特异结合能力的短肽结合在所述Leptin受体亲和肽的N端。本发明的亲和肽与Leptin受体具有高亲和性，且能够与MSC特异性结合，将该亲和肽连接到生物材料上，连接有具有胶原特异结合能力的短肽的亲和肽可实现与胶原支架的特异结合，从而提高生物材料对于表面表达Leptin受体的MSC的募集，获得更好的组织损伤修复效果，为研究MSC在组织工程修复和靶向治疗研究方面提供实验依据。

技术领域

本发明涉及一种Leptin受体亲和肽，尤其涉及一种可特异性结合间充质干细胞（MSC）的Leptin受体亲和肽及其筛选方法，并应用于组织工程修复，属于生物医药技术领域。

背景技术

间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSC）主要来源于中胚层，是一类具有高度自我更新能力和分化潜能的成体干细胞，是干细胞家族中的重要成员。MSC最初在骨髓中被发现，之后的研究发现MSC主要存在于全身结缔组织和器官间质中，目前已经可以从骨髓、胎盘、脐带、脂肪等组织中分离和制备间充质干细胞。基于MSC的多分化潜能，其在体内外特定的诱导环境中，可以定向分化成骨、软骨、脂肪、心肌等多种组织细胞。此外，MSC具有低免疫原性的特点，使其可以在移植应用中避免免疫排斥。MSC的这些特点给临床治疗提供了新的治疗思路和方案，可以作为组织工程修复中最适合的种子细胞，应用于骨与肌肉退行性疾病、脑血管疾病、自身免疫性疾病等的治疗。

在组织工程的发展过程中，利用支架材料吸附MSC应用于组织损伤修复再生已经被广泛认同。但由于体液的流动性，外源简单滴加到材料上的MSC和体内循环MSC均无法在支架材料上长时间停留，因此也无法发挥其分化和修复的作用。因此，如果可以对支架材料进行表面修饰，连接上与MSC具有强结合力的蛋白或多肽，从而提高MSC在材料表面的粘附率，必将更好地发挥支架材料上MSC的再生能力，提高支架材料的修复效果。在新近的研究中，研究人员发现，MSC中具有良好增殖分化能力的一小部分细胞表面表达Leptin受体，如果能找到能与Leptin受体具有强结合力的亲和肽，那就可以将之修饰到支架材料表面，使其作为桥梁作用特异性结合这一部分具有良好增殖分化能力的MSC。

如何去寻找Leptin受体亲和肽，噬菌体展示技术提供了成熟的解决方案。大量的研究已经证实，噬菌体展示技术在研究多肽或蛋白质的性质、相互识别和相互作用方面发挥了重要的作用。通过编码多肽的外源DNA片段与噬菌体表面蛋白的编码基因融合后，以融合蛋白的形式呈现在噬菌体的表面，被展示的多肽或蛋白可保持相对的空间结构和生物活性，展示在噬菌体的表面。噬菌体展示随机肽库技术由噬菌体展示技术基础上发展而来，当导入了大量具有不同外源基因的噬菌体后，就构成一个可以展示大量不同外源肽的噬菌体展示库。噬菌体展示肽库的优势在于它将蛋白质与其遗传信息之间提供了直接的物理联系，因此可以有效的对所需功能的克隆进行反复筛选，并随之对其进行扩增，并获得这些特异结合的外源肽所对应的基因序列，并在后期可以对这些多肽进行生物学功能的研究。在文库筛选的过程中，特定的噬菌体克隆由于对其配体的特异亲和性而不断的得到富集，从而使相对稀少的可以结合配体的克隆能够快速、有效地从一个大文库中被筛选出来。

因此，如何获得一种可与Leptin受体具有高度亲和性，并与MSC特异性结合的多肽，以及将其应用于组织工程修复，已然成为业界研究人员长期以来一直努力的方向。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种可特异结合间充质干细胞（MSC）的Leptin受体亲和肽，以克服现有技术中的不足。

本发明的另一目的还在于提供所述Leptin受体亲和肽的应用。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种Leptin受体亲和肽，它的序列如SEQ ID No.1所示。