[发明专利]用于辅助鉴别大豆油脂含量高低的分子标记Oil-4-3776551、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用于辅助鉴别大豆油脂含量高低的分子标记Oil-4-3776551的检测引物，其特征在于，检测分子标记Oil-4-3776551的引物的序列分别如SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4所示；所述分子标记Oil-4-3776551为大豆第4号染色体第3776551位点的SNP突变g.4-3776551 AG。

2.根据权利要求1所述的一种用于辅助鉴别大豆油脂含量高低的分子标记Oil-4-3776551的检测引物，其特征在于，所述分子标记Oil-4-3776551的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

3.一种用于辅助鉴别大豆油脂含量高低的试剂盒，其特征在于，包括检测分子标记Oil-4-3776551的引物；所述引物的序列如SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4所示。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述分子标记Oil-4-3776551的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于PCR的试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述用于PCR的试剂包括：dNTPs、Taq酶、PCR缓冲液、ddH₂O。

7.一种用于辅助鉴别大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，采用检测用于辅助鉴别大豆油脂含量高低的分子标记Oil-4-3776551的引物进行辅助鉴别；所述引物的序列分别如SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4所示；所述辅助鉴别的结果为AA的大豆材料为高油型大豆；检测结果为GG的大豆材料为低油型大豆。

8.根据权利要求7所述的一种用于辅助鉴别大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，所述分子标记Oil-4-3776551的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

9.根据权利要求7或8所述的一种用于辅助鉴别大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，所述辅助鉴别指：采用所述引物对待测大豆材料的DNA进行竞争性等位基因特异性PCR扩增，利用Kluster Caller基因分型仪检测PCR产物的荧光信号，按鉴别结果对Oil-4-3776551标记进行分型。

10.根据权利要求9所述的用于辅助鉴别大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，所述待测大豆材料的DNA提取自大豆叶片、种子、根、茎、花、果实。

11.根据权利要求9所述的用于辅助鉴别大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，所述PCR的反应体系为2.5 μL基因组DNA，正向引物1和正向引物2各0.00672 μL，反向引物0.0168 μL，2.5 μL 2×KASP Master mix缓冲液，0.231μL ddH₂O；正向引物1的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示，正向引物2的核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示。

12.根据权利要求11所述的用于辅助鉴别大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，PCR的反应程序为：95℃，15 min；以94℃、20s，65-57℃、60s，每个循环下降0.8度，共10个循环；以94℃、20s，57℃、60s，共33个循环。

13.一种大豆分子辅助育种方法，其特征在于，采用权利要求7-12任一所述的方法在大豆生长周期的任意阶段筛选出高油型大豆或低油型大豆用于大豆育种。