[发明专利]褪黑激素对子代獭兔毛囊细胞凋亡率影响的研究方法

说明书

本发明提供褪黑激素对子代獭兔毛囊细胞凋亡率影响的研究方法，涉及褪黑激素应用獭兔养殖领域，本发明包括如下研究步骤：确定褪黑激素埋植剂量；将实验用兔分为激素埋植组以及不埋植激素的对照组，以在实验用兔产子后，采集子代皮肤组织样本；制作皮肤组织样本的切片；切片的综合处理，以及对细胞凋亡数据的测定，通过对母代埋植褪黑激素，可显著减少了子代毛囊细胞的凋亡率，并且毛囊细胞与毛囊密度有直接关系，即，降低毛囊细胞的凋亡率可提高獭兔的毛囊密度，而毛囊密度是评定皮张的主要依据，提高毛密度可以提高獭兔皮张的价格，以增加养殖户的经济收益。

技术领域

本发明涉及褪黑激素应用獭兔养殖领域，尤其涉及褪黑激素对子代獭兔毛囊细胞凋亡率影响的研究方法。

背景技术

獭兔是世界著名的大型短毛兔品种，个性相当活泼好动，是一种典型的皮用型兔，生产方向是以皮为主，兼用其肉，因其毛皮酷似珍贵毛皮兽水獭，故称为獭兔。

獭兔养殖中，对于獭兔的皮毛管理是关于养殖户切身利益的重大事项，目前对于褪黑激素应用至獭兔养殖，来提高獭兔的毛发密度具有较高的正向作用，而现有褪黑激素的使用都是通过自身的埋植来提高毛囊密度，这样埋植主要有两个问题：

其一，自身埋植只能提高獭兔的次级毛囊密度，而对初级毛囊密度无影响，毛囊由初级毛囊和次级毛囊共同构成，因此如果要显著提高毛囊密度，需要从初级和次级毛囊两方面着手，胎儿是初级毛囊发生的主要时期，孕期埋植褪黑激素可以对胎儿的毛囊发生起作用，减少子代毛囊细胞的凋亡，提高獭兔的毛囊密度。

其二，自身埋植褪黑激素只能影响自身的毛囊密度，而在规模化养殖獭兔中，对单个体进行埋植，整体埋植数量大，成本高，且不排除獭兔个体因埋植褪黑激素不适宜，所导致的个体死亡问题。

遂，在獭兔养殖中，需求一种减少獭兔毛囊细胞的凋亡来提高獭兔毛囊密度的褪黑激素埋植方法。

发明内容

本发明的目的在于提供褪黑激素对子代獭兔毛囊细胞凋亡率影响的研究方法，以解决上述技术问题。

本发明为解决上述技术问题，采用以下技术方案来实现：

褪黑激素对子代獭兔毛囊细胞凋亡率影响的研究方法，其特征在于，包括如下研究步骤：

1)确定褪黑激素埋植剂量；

2)将实验用兔分为激素埋植组以及不埋植激素的对照组，以在实验用兔产子后，采集子代皮肤组织样本；

3)制作皮肤组织样本的切片；

4)切片的综合处理，以及对细胞凋亡数据的测定。

所述步骤2)中激素埋植组埋植褪黑激素缓释颗粒，不埋植激素的对照组埋植不含激素的硅胶颗粒；

所述步骤3)中切片的制作包括脱水、透明、包埋、切片、摊片和烤片；

所述步骤4)中切片的综合处理包括蛋白酶K修复、破膜、室温平衡、加反应液、DAPI复染细胞核、封片以及镜检拍照。

优选的，所述步骤1)中褪黑激素的埋植剂量为10mg。

优选的，所述步骤2)中实验用兔为若干母兔与同一只公兔精液进行人工授精，且在人工授精后诊断出受孕的孕兔作为实验用兔；

所述步骤2)中实验用兔产子后，自激素埋植组以及不埋植激素的对照组中选择数量相一致的窝仔兔，采用颈部移位法进行屠宰，屠宰后立即剥皮，于臀十字部位取2cm边长的方形皮肤块，用生理盐水冲洗后立即放入多聚甲醛溶液中固定。

优选的，所述步骤3)中皮肤组织样本的脱水为梯度脱水；

梯度脱水的具体步骤如下：

1)75％乙醇内脱水1小时；