[发明专利]一种靶向casc5基因的sgRNA及其应用

权利要求书

1.一种靶向casc5基因的sgRNA，其特征在于，所述靶向casc5基因的sgRNA包括SEQ IDNo.1所示的核酸序列。

2.一种casc5基因编辑系统，其特征在于，所述casc5基因编辑系统包括权利要求1所述的靶向casc5基因的sgRNA；

优选地，所述casc5基因编辑系统还包括Cas9；

优选地，所述Cas9包括Cas9核酸酶和/或Cas9 mRNA，优选为Cas9 mRNA。

3.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求1所述的靶向casc5基因的sgRNA；

优选地，所述重组细胞含有权利要求2所述的casc5基因编辑系统；

优选地，所述重组细胞为经过权利要求2所述的casc5基因编辑系统编辑后，基因组中敲除了casc5基因的受精卵。

4.一种权利要求3所述的重组细胞的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：

将权利要求2所述的casc5基因编辑系统导入受精卵的细胞质内，得到所述重组细胞；

优选地，所述导入包括显微注射。

5.一种小头症动物模型的构建方法，其特征在于，所述小头症动物模型的构建方法包括：

将权利要求2所述的casc5基因编辑系统导入受精卵的细胞质内，得到重组细胞；

重组细胞发育成F0代个体，与野生型交配，得到F1代杂合子；

将所述F1代杂合子自交，获得的F2代纯合子即为所述的小头症动物模型。

6.根据权利要求5所述的小头症动物模型的构建方法，其特征在于，所述casc5基因编辑系统的制备方法包括：

对Cas9基因进行体外转录，得到所述Cas9 mRNA；

将所述Cas9 mRNA与权利要求1所述的靶向casc5基因的sgRNA混合，得到所述casc5基因编辑系统。

7.根据权利要求5或6所述的小头症动物模型的构建方法，其特征在于，所述受精卵包括斑马鱼的受精卵。

8.根据权利要求5～7任一项所述的小头症动物模型的构建方法，其特征在于，所述F0代个体、F1代杂合子和F2代纯合子利用PCR扩增和测序进行鉴定；

优选地，所述PCR扩增的引物包括SEQ ID No.2～3所示的核酸序列。

9.根据权利要求5～8任一项所述的小头症动物模型的构建方法，其特征在于，所述的小头症动物模型的构建方法包括以下步骤：

(1)体外转录Cas9基因的mRNA，与靶向casc5基因的sgRNA混合，得到所述casc5基因编辑系统；

(2)收集斑马鱼的受精卵，将所述casc5基因编辑系统显微注射入所述斑马鱼的受精卵的细胞质内，得到重组细胞；

(3)培养所述重组细胞，生长为斑马鱼个体后，提取尾鳍组织的DNA，使用SEQ ID No.2～3进行PCR扩增，并对扩增产物进行测序鉴定，挑选casc5基因缺失的斑马鱼个体作为F0代斑马鱼；

(4)将所述F0代斑马鱼与野生型斑马鱼杂交，得到F1代杂合子斑马鱼；

(5)将所述F1代杂合子斑马鱼自交，使用SEQ ID No.2～3进行PCR扩增，并对扩增产物进行测序鉴定，筛选出F2代casc5基因敲除的纯合子斑马鱼，即所述的小头症动物模型。

10.权利要求1所述的靶向casc5基因的sgRNA、权利要求2所述的casc5基因编辑系统、权利要求3所述的重组细胞、权利要求4所述的重组细胞的构建方法或权利要求5～9任一项所述的小头症动物模型的构建方法中的任意一种或至少两种的组合在小头症药物筛选中的应用。