[发明专利]一种快速检测Aβ42的双抗体夹心ELISA试剂盒

权利要求书

1.一种人淀粉样蛋白Aβ42的双抗夹心ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括如下：

包被抗体：单克隆抗体BJ-1；

检测抗体：单克隆抗体6E10；

所述单克隆抗体BJ-1由2011年7月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C201155的杂交瘤细胞株BJNA分泌获得。

2.如权利要求1所述检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括抗原标准品：人淀粉样蛋白Aβ42，所述抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.如权利要求2所述检测试剂盒，其特征在于，所述检测抗体为：HRP标记的单克隆抗体6E10。

4.如权利要求2所述检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括：酶标板、洗涤液、稀释液、终止液、辣根过氧化物酶显示底物。

5.如权利要求4所述检测试剂盒，其特征在于，所述酶标板为可拆卸96孔酶标板；

优选的，所述洗涤液为将Tween-20按体积百分比0.1％的比例加入到PBS溶液中混合获得，PBS溶液的pH为7.4；

优选的，所述稀释液为5％FBS-PBST溶液；

优选的，抗体对孵育反应时间为1.5小时；

优选的，所述终止液为0.5mol/L H₂SO₄溶液。

6.如权利要求4所述检测试剂盒，其特征在于，所述辣根过氧化物酶显色底物为TMB溶液。

7.如权利要求4所述检测试剂盒，其特征在于，所述抗体BJ-1包被于酶标板上。

8.如权利要求4所述检测试剂盒，其特征在于，所述抗体BJ-1每孔2 000ng包板，检测抗体6E10-HRP稀释比为1:1 000。

9.权利要求1-8任一项所述检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的人淀粉样蛋白Aβ42；

(2)制备抗体BJ-1；

(3)将步骤(2)制得的抗体BJ-1包被于酶标板上；

(4)按照常规要求分装其余试剂，然后组装试剂盒。

10.如权利要求9所述检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)的包被方法，包括如下步骤：

采用直接吸附法，用PBS将捕获抗体BJ-1每孔2000ng包板，2～8℃过夜；PBST洗3次，每次3min，然后用10％FBS-PBST封闭液封闭，200μL/孔，37℃2h，PBS洗3次，每次3min，弃去液体然后放入37℃孵箱中烘干，烘干后放入锡纸袋中并同时加入2～3包固体干燥剂，然后用真空密封机抽真空后2～8℃保存。