[发明专利]蟾皮甾烯总内酯提取物、甾烯内酯单体化合物及其在抗流感病毒中的用途

说明书

本发明公开了蟾皮甾烯总内酯提取物、甾烯内酯单体化合物及其在抗流感病毒中的用途。本发明从干蟾皮提取物中制备得到蟾皮甾烯总内酯提取物，进一步利用反复硅胶柱色谱、半制备高效液相色谱、重结晶等手段从中华大蟾蜍皮的乙醇提取物中分离得到多个甾烯总内酯单体化合物。采用H7N9亚型禽流感毒株体外感染MDCK细胞为模型和ICR小鼠为体内模型对蟾蟾皮甾烯总内酯提取物以及甾烯内酯单体化合物体内外抗流感病毒的药效作用进行评价，结果发现蟾蟾皮甾烯总内酯提取物以及甾烯内酯单体化合物均具有显著的抑制流感病毒活性。

技术领域

本发明涉及甾烯总内酯提取物，尤其涉及蟾皮甾烯总内酯提取物以及分离的甾烯内酯单体化合物，本发明进一步涉及蟾皮甾烯总内酯提取物以及分离的甾烯内酯单体化合物在制备抗流感病毒药物中的用途，属于蟾皮甾烯总内酯提取物、单体化合物及其抗流感病毒用途领域。

背景技术

蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufomelanostictus Schneider的干燥皮。其性凉，味辛，有小毒，归肝、脾、肺经。具有清热解毒、利水消胀、止咳平喘、利水消胀的功效。用于痈疽，肿毒，瘰疬，肿瘤，疳积腹胀，久咳久喘，中国民间多用于治疗原发性肝癌、肺癌等，由单味蟾皮提取物，先后开发了华蟾素片、华蟾素胶囊、华蟾素颗粒、华蟾素口服液、华蟾素注射液等产品，用于中晚期肿瘤，慢性乙型肝炎等症，均有确切的临床疗效。

迄今为止，尚未见从蟾皮中提取的蟾皮甾烯总内酯提取物以及从中分离的单体化合物具有抗流感病毒活性的报道。

发明内容

本发明的目的之一是提供从蟾皮中分离得到具有抗流感病毒活性的蟾皮甾烯总内酯提取物；

本发明的目的之二是提供从蟾皮中分离得到具有抗流感病毒活性的单体化合物；

本发明的目的之三将所述的蟾皮甾烯总内酯提取物以及所分离的单体化合物应用于制备抗流感病毒的药物。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种具有抗流感病毒活性的蟾蜍甾烯总内酯提取物，其主要的有效成分是华蟾酥毒基和蟾毒灵；作为一种优选的具体实施方案，按照质量百分比计，华蟾酥毒基的含量为33.3％，蟾毒灵的含量为24.6％。

作为参考，本发明提供了一种制备所述蟾蜍甾烯总内酯提取物，包括：(1)干蟾皮提取物浸膏硅胶拌样，硅胶柱干法装柱干法上样，环己烷-丙酮梯度洗脱，收集洗脱流份；(2)将洗脱流份再以硅胶拌样，硅胶柱干法装柱干法上样，环己烷-丙酮梯度洗脱，收集洗脱流份，回收溶剂并干燥，即得。

作为一种优选的具体实施方案，步骤(1)中采用环己烷-丙酮梯度洗脱时的梯度洗脱方式是10:1-8:1-5:1-2:1，收集5:1的洗脱流份；步骤(2)中采用环己烷-丙酮梯度洗脱时的梯度洗脱方式是10:1-8:1-5:1-2:1，收集5:1的洗脱流份。

本发明进一步提供了从蟾皮提取物中分离得到的具有抗流感病毒活性的单体化合物，这些单体化合物的结构式如下：

本发明中上述述化合物的酸加成的盐、溶剂化物或前药也包括在本发明之中。

本发明的蟾蜍甾烯总内酯提取物或从蟾皮中分离的单体化合物可以与酸生成其药学上可接受的盐。所述酸可以包括无机酸或有机酸，与下列酸形成的盐是特别优选的：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、磷酸、硝酸、甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸、三氟乙酸和天冬氨酸。

本发明的从蟾皮中分离的单体化合物还可以是溶剂化物，所述的溶剂可以是乙醇、水等，其中，可含有不同量的水，如一水合物、半水合物、一个半水合物、二水合物或者三水合物等。