[发明专利]一种伯克霍尔德菌及其发酵产FR901464的方法

说明书

本发明公开了一种伯克霍尔德菌(Burkholderia sp.)HDCC00024，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC NO.22290，保藏日期为2021年05月08日。所述的伯克霍尔德菌生产能力高，FR901464的效价可达到2360mg/L以上，其发酵积累FR901464的能力比现有技术中其他菌种有大幅度的提高，便于工业化生产。

技术领域

本发明涉及工业微生物发酵技术领域，具体涉及一种伯克霍尔德菌及其发酵产FR901464的方法。

背景技术

FR901464是一种具有高效抗肿瘤活性的天然化合物，最初由Nakajima等人于1996年通过发酵从假单孢菌Pseudomonas sp.中分离纯化得到(Nakajima,H.；Sato,B.；Fujita,T.；Takase,S.；Terano,H.；Okuhara,M.Antitumor substances,FR901463,FR901464 andFR901465.I.taxonomy,fermentation,isolation,physico-chemical properties andbiological activities[J].J.Antibiot.,1996,49:1196-1203.)，其中，文中所述的假单孢菌Pseudomonas sp.No.2663发酵产量约360mg/L。其化学结构式如式1所示。

作为真核细胞中前体mRNA的剪接抑制剂，FR901464对肿瘤细胞生长有很强的抑制作用，活性测试表明，FR901464对人类实体肿瘤细胞产生了十分显著的抑制作用，实验测试得IC50值在0.3-3.4nM。由于FR901464在抗肿瘤方面表现了极高的活性，且其生理活性独特，刚发现就引起了科学家们的广泛关注。

由于FR901464所具有的生物学和化学特性，在开展相关的抗肿瘤生物活性检测实验中，需要大量制备相应的FR901464样品，以满足各种临床前的活性研究，而现目前，已报道的关于FR901464的制备方法主要有两种，一种为发酵获得，另一种为化学合成。发酵法获得FR901464，如上文所述，Nakajima等人于1996年通过发酵从假单孢菌Pseudomonassp.No.2663可获得360mg/L的FR901464，发酵产量较低，且考虑到FR901464在制备过程中存在结构不稳定，分离纯化工艺复杂及收率偏低等问题，因而，现阶段的发酵水平对获得高纯度的FR901464成本较高。而化学合成FR901464方面的研究也已经有了很多报道，如Jacobsen及其团队完成了FR901464的第一次全合成。随后，Kitahara和Koide及其团队报道了另外两种合成方法(Kazunori Koide,Brian J.Albert.Total Syntheses ofFR901464.2007,65(2):119-126.)。但是，总体上，化学合成存在反应步骤长，收率低，且反应过程中用到易燃易爆有机试剂，对安全性提出了很高的要求与挑战，且成本方面也没有明显优势。

针对现有技术中发酵获得FR901464存在发酵产量低，而化学合成制备工艺中存在的合成步骤长、收率低，且用到的试剂易燃易爆，较不安全等一系列的问题，因此，本发明寻求一种新的微生物，并可通过简单的发酵即可获得较高发酵产量的FR901464，从而实现FR901464较低的生产成本。

发明内容

为了解决FR901464现有制备方法不足的问题，本发明的目的之一在于提供一种新的FR901464生产菌，该菌为伯克霍尔德菌(Burkholderia sp.)HDCC00024，保藏编号为CGMCC NO.22290。

本发明伯克霍尔德菌(Burkholderia sp.)HDCC00024的微生物菌种于2021年05月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC NO.22290，分类名为伯克霍尔德菌(Burkholderia sp.)，并登记在册，证明存活。