[发明专利]靶向肿瘤的体内原位诱导CAR-T细胞的递送系统及其应用

权利要求书

1.一种靶向肿瘤的体内原位诱导CAR-T细胞的递送系统，其特征在于，所述递送系统包括纳米颗粒、用血小板膜包裹所述纳米颗粒形成的纳米载体以及Anti-CD3ef（ab’）2；其中，所述纳米颗粒是由阳离子聚合物、CAR基因质粒和CRISPR系统组装而成，通过所述纳米载体递送CRISPR系统至所述肿瘤实现原位编辑T细胞；

CD123基因质粒和CRISPR的质粒比例为1：1，阳离子聚合物与CD123基因质粒的比例为30：1；所述阳离子聚合物为PBAE；

所述CRISPR系统包括如下任一项组合方式：

(1)Cas9和gRNA的质粒DNA；

(2)Cas9蛋白与gRNA组装成的核蛋白颗粒RNP；

(3)Cas9 mRNA和gRNA；

所述肿瘤为淋巴瘤。

2.如权利要求1所述的靶向肿瘤的体内原位诱导CAR-T细胞的递送系统，其特征在于，所述血小板膜源自动物或者人的血浆样品中的血小板。

3.如权利要求1所述的靶向肿瘤的体内原位诱导CAR-T细胞的递送系统，其特征在于，所述CAR基因质粒包括T细胞中能表达特异性靶向肿瘤细胞或者肿瘤微环境细胞的抗体，同时能分泌刺激T细胞活化和增殖的细胞因子。

4.如权利要求1所述的靶向肿瘤的体内原位诱导CAR-T细胞的递送系统，其特征在于，所述CAR基因质粒和所述gRNA具有相匹配的同源臂序列，所述同源臂序列为所述gRNA靶向T细胞基因序列左侧和右侧不少于200bp序列。

5.如权利要求1-4任一项所述的靶向肿瘤的体内原位诱导CAR-T细胞的递送系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将组装纳米颗粒的阳离子聚合物、CAR基因质粒和CRISPR系统分别用乙酸钠稀释后，再将阳离子聚合物等体积滴加CRISPR系统中，然后加入CAR基因质粒，室温静置15-20min，组装成纳米颗粒；

步骤2：自血浆样品中分离血小板，得到血小板膜，再将所述血小板膜与所述纳米颗粒混合孵育，经超声、过滤，得到血小板膜包裹纳米颗粒的纳米载体。

6.如权利要求1所述的靶向肿瘤的体内原位诱导CAR-T细胞的递送系统在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤为淋巴瘤。