[发明专利]一种microRNA检测用质控品的制备方法

说明书

本发明公开了一种microRNA检测用质控品的制备方法，步骤包括（1）细胞富集；（2）样本模拟基质稀释；（3）microRNA释放；（4）杂质去除。本发明质控品可对microRNA检测进行全方位质控，而且整体制备流程简单，成本较低，易于储存和转运，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术领域，特别涉及一种microRNA检测用质控品的制备方法。

背景技术

microRNA是一类长约19-25个核苷酸的单链非编码RNA分子，这些microRNA通常靶向一个或多个mRNA，通过抑制靶基因的翻译过程对基因表达进行调节。现有研究表明，常见的癌症存在相关的microRNA表达改变，而且microRNA通常定位于与癌症相关的基因组区域，因此可推测microRNA可能发挥着抑癌基因和癌基因的双重作用（Esquela-Kerscher,A. and Slack, F. J(2006) Nat Rev Cancer 6, 259-269; Calin, G. A. and Croce,C. M.(2007) J Clin Invest 117, 2059-2066; Blenkiron, C. and Miska, E. A.(2007) Hum Mol Genet 16, R106-R113）。成熟的microRNA会与其他蛋白质一起组成miRNA-蛋白质复合体，因此它们在体外非常稳定（Lu, J. et al. , (2005) Nature 435,834-838; Lim, L. P. et al. , (2005) Nature 433, 769-773），在作为肿瘤生物标志物方面比mRNA具有更大的优势，已证实的microRNA在癌症中的异常表达更突出了它们作为诊断和预后生物标志物的潜在应用价值。因此，对microRNA准确、高效、精准的检测是当前研究以及后续产品开发的重要举措。

实时荧光定量RT-PCR凭借其高灵敏度、高特异性、重复性好等优势，已成为检测microRNA的一种重要方法。然而，RT-PCR整体检测流程较为复杂，分为核酸提取与纯化、逆转录、逆转录产物扩增等步骤，所以容易受到样本提取、检测人为因素在内的多种因素的影响。因此，极有必要在其检测过程中构建严格的质量控制体系，建立质控体系的条件是引入符合条件的质控品对整体检测流程进行评估，这对microRNA检测结果的准确性具有重要的意义。

目前，用于检测microRNA使用的质控品普遍使用人工合成基因，将人工合成基因稀释配制成质控品后，直接用于后续的逆转录以及扩增实验。

使用人工合成基因存在以下问题：

一、因为microRNA序列较短，通常由19-25个核苷酸组成，而且合成的基因不是miRNA-蛋白质复合体，没有蛋白质的保护，容易降解，没有良好的稳定性。

二、不参与提取的过程，不能保证提取环节的质量控制。即使使用人工合成基因参与到提取环节，也会因为样本基质和microRNA存在结构的不同，而不能准确模拟样本检测流程。

发明内容

本发明的目的在于提供一种microRNA检测用质控品的制备方法，质控品可对microRNA检测进行全方位质控，而且整体制备流程简单，成本较低，易于储存和转运，具有良好的应用前景。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种microRNA检测用质控品的制备方法，包括以下步骤：

（1）细胞富集：将完成计数的细胞进行离心，弃掉上清，得到沉淀的细胞；

（2）样本模拟基质稀释：使用样本模拟基质稀释步骤（1）所得沉淀的细胞；

（3）microRNA释放：通过物理手段处理步骤（2）稀释后的细胞使细胞破碎，释放细胞内的microRNA；