[发明专利]一种特异性识别IYVLVMLVL肽段的荧光PCR引物组及其应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种特异性识别IYVLVMLVL肽段的荧光PCR引物组及其应用。本申请的引物组是根据HLAA24分型，EBV病毒抗原肽段IYVLVMLVL的TCR设计的包括位点为L24‑49和/或L24‑2引物对。本申请的引物组的序列如SEQIDNO.1～4所示。本申请的引物组能特异性的识别HLAA24分型患者体内EBV病毒抗原肽段IYVLVMLVL的TCR，为追踪监测患者体内TCR‑T细胞药物提供依据。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种特异性识别IYVLVMLVL肽段的荧光PCR引物组及其应用。

背景技术

EBV是可以感染人类的疱疹病毒家族的一员。EBV感染与某些类型的癌症有关。这些因EBV病毒感染所导致的癌症患者有望在TCR-T细胞治疗中获益。

TCR-T细胞治疗是有望治疗实体肿瘤的新一代免疫细胞疗法。在TCR-T细胞治疗的过程中，需要不断监测被输注到病人体内的药用TCR-T细胞的生长和续存的情况。能实现此目的技术手段中，荧光定量PCR(qPCR)是检测灵敏度很高的技术手段。利用qPCR监测TCR-T细胞，需要针对TCR-T细胞的特定TCR基因序列设计qPCR引物。然而现有技术并未发现针对TCR基因序列所设计的qPCR引物组应用于检测TCR-T细胞在病人体内生长和续存状况中。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种特异灵敏的追踪TCR-T细胞药物的引物组，尤其涉及一种特异性识别IYVLVMLVL肽段的荧光PCR引物组及其应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种TCR引物组，包括位点为L24-2和/或L24-49的引物对。

作为优选，所述引物组依据HLAA24分型，EBV病毒抗原肽段IYVLVMLVL的TCR设计。

作为优选，位点为L24-2的TCR引物对的序列如SEQ ID NO.1～2所示；

位点为L24-49的TCR引物对的序列如SEQ ID NO.3～4所示。

本发明还提供了所述的引物组在制备特异性检测HLAA24分型患者体内EBV病毒抗原肽段IYVLVMLVL的TCR产品中的应用。

作为优选，所述产品为试剂盒产品。

作为优选，所述试剂盒为荧光定量PCR试剂盒。

本发明提供了一种特异性识别IYVLVMLVL肽段的荧光PCR引物组及其应用。本申请的引物组是根据HLAA24分型，EBV病毒抗原肽段IYVLVMLVL的TCR设计的。将本申请的引物组制备成荧光定量PCR试剂盒，追踪患者体内TCR-T细胞药物时，能特异的检测到药物的灵敏度为27个拷贝数的基因片段。

附图说明

图1为L24-2位点质粒DNA标准品的扩增曲线(从左到右质粒DNA标准品的稀释度分别为10⁸拷贝、10⁷拷贝、10⁶拷贝、10⁵拷贝、10⁴拷贝、10³拷贝、10²拷贝、10¹拷贝的基因片段)。

图2为L24-2位点质粒DNA标准品扩增产物的电泳图(从左到右质粒DNA标准品的稀释度分别10⁸拷贝、10⁷拷贝、10⁶拷贝、10⁵拷贝、10⁴拷贝、10³拷贝、10²拷贝、10¹拷贝的基因片段)。

图3为L24-2位点质粒DNA标准品的标准曲线图。