[发明专利]一种香蕉枯萎病菌分生孢子的干式移植方法

说明书

一种香蕉枯萎病菌分生孢子的干式移植方法，从产孢菌落上粘附孢子并直接移植及散布到观测平板上，孢子的干式移植操作步骤如下：1)分生孢子的培养准备；2)移孢棉签的无菌处理；3)观测琼脂平板的准备；4)密集孢子的分散；5)分生孢子的移印；6)分生孢子的培养处理。本发明的优点：1)不需要将关键的工作材料(香蕉枯萎病菌的分生孢子)配备成孢子悬浮液，减少污染风险。2)可以在条状的琼脂平板上散布香蕉枯萎病菌分生孢子，并观测其萌发与生长活动，提高观测工作的效率与效果，有利于开展孢子萌发生物学研究中的多因素作用设计与批量试比较。

技术领域

本发明涉及植物病理学技术，具体是一种香蕉枯萎病菌分生孢子的干式移植方法。

背景技术

香蕉枯萎病是我国香蕉产业的一种重要病害，可给香蕉生产造成重大损失，严重的可以毁掉整个香蕉园。该病害由香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)侵染引起。分生孢子是香蕉枯萎病菌的无性繁殖体，在香蕉枯萎病的病害循环和病害流行中发挥重要作用。充分认识分生孢子的萌发生物学对有效防控香蕉枯萎病的发生流行至关重要。在香蕉枯萎病菌繁殖体的萌发生物学及相关的研究工作中，经常需要将分生孢子移植到培养平板上进行观测培养，这种观测培养不仅要求培养平板上的孢子处于恰当的分散状态，也要求各个移植处理平板上的孢子数量及分布保持一致。只有这样才能高质量完成有关的研究任务。

当前将香蕉枯萎病菌分生孢子从菌落上转移及分散到培养平板的方法，几乎都是水液载体移植方法，该方法的主要程序是，先用适合的产孢培养基进行香蕉枯萎病菌的产孢培养，再用水将产孢培养菌落的孢子洗涤出来，配备成孢子悬浮液(简称孢子液)，然后用移液器将孢子液定量转移到培养基观测平板面上，并用工具将孢子液涂布分散到平板上，再进行有关的培养与观察等测试工作。该方法看似简单，但实践操作上仍存在相当的难度与繁琐，主要表现在，关键的工作材料(香蕉枯萎病菌的分生孢子)的获得技术操作中，往往需要采取过滤操作以脱减孢子液中的菌丝，也需要离心沉淀操作脱除孢子液中的培养基以及培养代谢产物等，这些操作过程均存在较大的污染风险，另外，需要将孢子液的孢子浓度调整到合适的范围，因此需要反复的调配与取样到计数板或载玻片，还要转到生物显微镜下观察计数，比较繁琐。

发明内容

本发明的目的是，提供一种香蕉枯萎病菌分生孢子的干式移植方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种香蕉枯萎病菌分生孢子的干式移植方法，从产孢菌落上粘附孢子并直接移植及散布到观测平板上，孢子的干式移植操作步骤如下：

1.分生孢子的培养准备

用马铃薯蔗糖琼脂培养基，进行香蕉枯萎病菌的产孢培养，直至产孢菌落上形成密集的分生孢子。

2.移孢棉签的无菌处理

先用记号笔在普通棉签上点画标记，再将该棉签放入培养皿内，常规高压灭菌并烘干后备用。

3.观测琼脂平板的准备

用常规琼脂培养基制备孢子观测平板，用灭菌刀片将培养皿倒制的琼脂平板切成长条状，并将该琼脂条挑转到灭菌载玻片上，作为分生孢子观测平板。

4.密集孢子的分散

取步骤2准备的灭菌棉签，将棉签端部球面碰触步骤1准备的产孢菌落，接触菌落的球面粘附菌落上密集的孢子；然后转移到空白琼脂平板上抹涂和点印，稀散棉签球面上吸附的密集孢子。

5.分生孢子的移印

将步骤4稀散孢子后的棉签球面，在步骤3准备的孢子观测琼脂平板面的不同位置作有序连续点印，得到孢子数量一致、且孢子分散性良好的孢子印迹。

6.分生孢子的培养处理