[发明专利]一种对氨基苯甲酸羟化酶及其应用

说明书

本发明公开了一种对氨基苯甲酸羟化酶及其应用，属于生物工程领域。解决了氨基苯甲酸羟化酶催化效率低的技术问题。本发明提供了一种来自于Agaricus bisporus var.bisporusH97的一种对氨基苯甲酸羟化酶并且编码的基因经过优化后得到新的基因，新基因应用为编码具有催化对氨基苯甲酸脱羧羟化生成对氨基苯酚的对氨基苯甲酸羟化酶。可以用于氨基酚类化合物的绿色生物制备，具有重要的工业应用潜力。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种对氨基苯甲酸羟化酶及其应用。

背景技术

氨基苯酚类化合物似是我国应用较广泛的一种精细有机化工中间体，应用于染料工业、医药工业、也用于制备显影剂、抗氧剂和石油添加剂等产品。目前氨基酚的合成都是采用化学法，其合成路线基本都是以硝基苯酚纳、苯酚、硝基苯为原料进行，虽然此类化学合成的技术较为成熟，但其中仍存在很多的问题例如：原料毒性较大；反应条件苛刻且催化剂成本高，生产过程会产生大量的含酚含胺污水等。因此我们希望开发氨基酚的绿色生物合成方法，这就需要寻找能高效催化反应的酶。对氨基苯甲酸羟化酶(4-aminobenzoatehydroxylase)是一种来源于双孢蘑菇变种株Agaricus bisporus var.bisporus H97的以FAD，NADH为辅酶的脱羧羟化酶，可用于催化对氨基苯甲酸及类似物脱羧羟化生产对氨基酚等的反应，目前为止只有一例此类酶及活性的研究报导(Purification and propertiesof 4-aminobenzoate hydroxylase,a new monooxygenase from Agaricusbisporus.Journal of Biological Chemistry,1986,261(28):13203-13209.)。然而目前对于该对氨基苯甲酸羟化酶的获取方法依旧依赖于由蘑菇中分离，整个过程繁琐，蛋白不稳定来源有限，且该酶催化效率较低，因此需要寻找活性更高的对氨基苯甲酸羟化酶。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种具有稳定来源的氨基苯甲酸羟化酶，解决了氨基苯甲酸羟化酶催化效率低的技术问题。

在一种实施方式中，所述氨基苯酚类化合物为对氨基苯甲酸、2-氨基-3-羟基苯甲酸、2-氨基-4-氯苯甲酸、4-氨基-3-氯苯甲酸、4-氨基-3-氟苯甲酸、4-氨基-2-氟苯甲酸、5-氟邻氨基苯甲酸和4-氟邻氨基苯甲酸中的任意一种。

本发明提供了一种对氨基苯甲酸羟化酶，所述对氨基苯甲酸羟化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供了一种编码上述对氨基苯甲酸羟化酶的基因。

本发明提供了一种酶制剂，所述酶制剂含有上述的对氨基苯甲酸羟化酶。

本发明提供了一种重组微生物细胞，所述重组微生物含上述对氨基苯甲酸羟化酶或山上述的基因。

在一种实施方式中，所述微生物细胞为原核生物或真核生物。

在一种实施方式中，所述微生物细胞为大肠杆菌。

本发明提供了一种促进氨基苯酚类化合物催化反应的方法，所述方法是将上述重组微生物细胞加入到含有苯胺类化合物的水溶液中，在pH＝4-10，温度为30-60℃的条件下进行催化反应。

在一种实施方式中，所述氨基苯酚化合物为对氨基苯甲酸、2-氨基-3-羟基苯甲酸、2-氨基-4-氯苯甲酸、4-氨基-3-氯苯甲酸、4-氨基-3-氟苯甲酸、4-氨基-2-氟苯甲酸、5-氟邻氨基苯甲酸和4-氟邻氨基苯甲酸中的任意一种。

本发明还提供了上述的对氨基苯甲酸羟化酶、上述的酶制剂、上述的重组微生物细胞在催化氨基苯酚类化合物脱羧羟化反应中的应用。