[发明专利]抗H5N1型禽流感病毒药物及其应用

说明书

抗H5N1型禽流感病毒药物及其应用，有效成分为pCAG‑scFv 1A2‑GFP和IgG1，所述pCAG‑scFv 1A2‑GFP的轻链的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID No:2所示；所述IgG1的轻链的氨基酸序列如SEQ ID No:5所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID No:6所示小鼠体内试验结果表明：当IgG1用量为15mg/kg，重组质粒scFv1A2为30μg时，该pCAG‑scFv 1A2‑GFP和IgG1抗体组合对500 TCID50 A/Jiangsu/1/2007(H5N1)感染的小鼠达到66.67%的存活率，具有较好的保护率。

技术领域

本发明属于抗H5N1型高致病性禽流感抗体技术领域，涉及一株抗H5N1型高致病性禽流感病毒全人源抗体组合pCAG-scFv 1A2-GFP和IgG1及其应用。

背景技术

禽流感是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病。近十年来，H5N1 型禽流感肆虐全球，不仅给世界养禽业造成损失，而且随着禽流感病毒基因组的重组或变异，使原来只在禽间传播的少数H5N1 型禽流感病毒获得了能在人体内繁殖的能力，从而具有感染人的能力，主要引起急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征（ARDS）、多脏器功能衰竭等多种并发症，虽然目前尚未有大范围的疫情爆发，但每年都有散发病例的出现；另一方面，由于人体内没有针对H5N1型禽流感病毒抗原的抗体，人感染高致病性禽流感病毒(HPAIV)后则会呈现高发病率和高死亡率的特征，因此，HPAIV 对人类健康和世界公共卫生安全也已构成重大威胁。

作为化学药物和疫苗的有效补充，由抗体介导的预防和临床治疗措施已显现良好的效果，其应用前景得到专家的认同。作为人体内一种最重要的抗病毒免疫介质，抗体分子可以通过阻断病毒颗粒与其受体的结合、激活巨噬细胞、NK 细胞等杀伤细胞，激活补体和T细胞效应等多种机制来杀伤、清除病毒颗粒及受感染细胞。抗体不仅可以对流行区的高危易感人群进行紧急被动免疫，对于临床病人还可起到一定的治疗作用。

病毒是胞内寄居病原体，利用宿主细胞的核酸和蛋白装置来增殖，通过与宿主细胞表面受体的结合，可感染众多的靶细胞。病毒的生命形式存在两种方式：保持感染活性的细胞外形式和显示复制活性的细胞内形式。普通的抗体制剂，受其分子量限制，难以穿透细胞膜进入细胞内，因此，在本研究中，我们将前期研究获得的scFv 1A2基因组通过与高效表达载体连接后由脂质体介导转入细胞内，并进一步表达细胞内抗体，抑制已感染细胞内的病毒的组装，降低胞内病毒的复制速度，通过控制细胞内病毒数量以期待增加宿主细胞自身分泌的I型干扰素（IFN α\β）等细胞因子的分泌，进而促进特异性的CTL (CD8+T)细胞杀伤作用及相关细胞因子的转录水平；另一方面，将scFv 1A2抗体通过基因工程手段构建为含有Fc段的全分子抗体IgG1，使其能中和细胞外的病毒并有效的诱导机体的“抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用”(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)生物学效应。通过全人源细胞内抗体和细胞外抗体组合的治疗达到同时抑制细胞内病毒的增殖和细胞外病毒的感染，从而提高机体免疫水平，以期待提高HPAIV感染小鼠的生存率，为进一步探讨有针对性的HPAIV抗体治疗方案奠定基础。

发明内容

解决的技术问题：本发明针对上述技术问题，提供一种抗H5N1型禽流感病毒药物及其应用，利用抗H5N1型高致病性禽流感病毒全人源抗体组合pCAG-scFv 1A2-GFP和IgG1制备预防和治疗H5N1型禽流感病毒感染药物。