[发明专利]一种检测外泌体相关microRNA分子的方法在审
| 申请号： | 202110697292.9 | 申请日： | 2017-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN113604564A | 公开（公告）日： | 2021-11-05 |
| 发明（设计）人： | 王弢;渠香云;董肇楠;贾芸莉;马雪情 | 申请（专利权）人： | 江苏为真生物医药技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市苏州工业园*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 外泌体 相关 microrna 分子 方法 | ||
1.一种用于非疾病诊断目的检测外泌体相关microRNA分子的方法，其特征在于：所述方法为两步法检测，将microRNA分子逆转录为cDNA，通过PCR反应将cDNA扩增为DNA，所述逆转录的反应体系包括microRNA分子特异性茎环结构逆转录引物，逆转录反应时通过连接酶将短臂与microRNA分子相连接。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述特异性茎环结构逆转录引物的颈部的loop环部设计非连续互补碱基对TGCG和CGCA构成钥匙状结构。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述PCR反应的反应体系包括PCR上游引物、PCR通用下游引物和用于检测microRNA分子的特异探针。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述microRNA分子为miR-21、miR-486-5p、miR-205、miR-126、miR-152、Let-7a或miR-148a。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述miR-21的逆转录引物序列如SEQ IDNO.1所示，PCR上游引物如SEQ ID NO.2所示，PCR通用下游引物如SEQ ID NO.3所示，特异探针核苷酸序列如SEQ ID NO.4。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述miR-486-5p的逆转录引物序列如SEQID NO.5所示，PCR上游引物如SEQ ID NO.6所示，PCR通用下游引物如SEQ ID NO.3所示，特异探针核苷酸序列如SEQ ID NO.7。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述miR-205的逆转录引物序列如SEQ IDNO.8所示，PCR上游引物如SEQ ID NO.9所示，PCR通用下游引物如SEQ ID NO.3所示，特异探针核苷酸序列如SEQ ID NO.10。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述miR-126的逆转录引物序列如SEQ IDNO.11所示，PCR上游引物如SEQ ID NO.12所示，PCR通用下游引物如SEQ ID NO.3所示，特异探针核苷酸序列如SEQ ID NO.13。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述let-7a的逆转录引物序列如SEQ IDNO.14所示，PCR上游引物如SEQ ID NO.15所示，PCR通用下游引物如SEQ ID NO.3所示，特异探针核苷酸序列如SEQ ID NO.16。
10.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述miR-152的逆转录引物序列如SEQ IDNO.17所示，PCR上游引物如SEQ ID NO.18所示，PCR通用下游引物如SEQ ID NO.3所示，特异探针核苷酸序列如SEQ ID NO.19。
11.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述miR-148a的逆转录引物序列如SEQID NO.20所示，PCR上游引物如SEQ ID NO.21所示，PCR通用下游引物如SEQ ID NO.3所示，特异探针核苷酸序列如SEQ ID NO.22。
12.利用权利要求1～11任一项所述的方法所制备的试剂盒。
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