[发明专利]一种耐药型念珠菌的鉴别方法及鉴别试剂盒

权利要求书

1.一种耐药型念珠菌的鉴别方法，其特征在于，所述鉴别方法包括采用MKT077孵育待鉴别菌株，并检测孵育后菌株的荧光发射光谱。

2.如权利要求1所述耐药型念珠菌的鉴别方法，其特征在于，所述耐药型为外排泵基因高表达耐药类型；优选的，为MDR1基因高表达的耐药菌株。

3.如权利要求1所述耐药型念珠菌的鉴别方法，其特征在于，所述念珠菌为包括但不限于白色念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌或光滑念珠中的一种；优选的，所述念珠菌为白色念珠菌。

4.如权利要求2或3所述耐药型念珠菌的鉴别方法，其特征在于，所述耐药型念珠菌为多药耐药型白色念珠菌。

5.如权利要求1所述耐药型念珠菌的鉴别方法，其特征在于，所述鉴别方法还包括向待鉴别菌株中加入苯菌灵共同孵育。

6.如权利要求5所述耐药型念珠菌的鉴别方法，其特征在于，所述鉴别方法具体步骤如下：向活化后的待测菌株中加入MKT077及苯菌灵共同孵育0.5～1.5h，所述MKT077的浓度为0.8～2.5μg/mL，所述苯菌灵的浓度为4～6μg/mL，孵育完成后收集细胞进行荧光光谱检测；优选的，所述孵育温度为28～32℃，孵育时间为0.8～1.2h；

进一步的，所述鉴别方法步骤如下：调整培养基中待测菌株的细胞数量为1.0×10⁶，向培养基中加入MKT077及苯菌灵，使MKT077的终浓度为2μg/mL，所述苯菌灵的浓度为5μg/mL，将所述孵育体系置于30℃条件下孵育1h；孵育完成后，弃去培养基并清洗菌株细胞后进行荧光光谱检测；

或，所述鉴别方法步骤如下：调整培养基中待测菌株的细胞数量为1.0×10⁶，向培养基中分别加入MKT077、MKT077及苯菌灵，使MKT077的终浓度为2μg/mL，所述苯菌灵的浓度为5μg/mL，将所述孵育体系置于30℃条件下孵育1h；孵育完成后，弃去培养基并清洗菌株细胞后进行荧光强度值检测，在苯菌灵和MKT077共孵育与MKT077单孵育相比红移程度增大且比较明显的，判定为白色念珠菌；在MKT077孵育终浓度为4μg/mL，与白色念珠菌野生菌株(非耐药菌)相比，待测菌株荧光值出现了红移的，，即为Mdr1耐药型白色念珠菌；若菌株在MKT077孵育、MKT077及苯菌灵孵育后均出现红移但程度相近的，所述菌株可判定为念珠菌属；未出现红移的，所述菌株不属于念珠菌。

7.如权利要求1所述耐药型念珠菌的鉴别方法，其特征在于，所述荧光发射光谱的检测方式包括荧光分光光度计、荧光检测仪或流式细胞仪。

8.一种组合物，其特征在于，所述组合物中包括MKT077及苯菌灵。

9.MKT077、苯菌灵或权利要求8所述组合物在制备耐药型念珠菌鉴别产品中的应用。

10.一种鉴别耐药型念珠菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括MKT077、苯菌灵或权利要求8所述组合物；

优选的，所述试剂盒的使用按照权利要求1-7任一项所述耐药型念珠菌的鉴别方法实现；

优选的，所述试剂盒中还包括菌株培养基及清洗试剂；其中，MKT077、苯菌灵或所述组合物可采用培养基作为溶剂进行配制；所述清洗试剂为PBS溶液。