[发明专利]抗丝状支原体丝状亚种P0071蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗丝状支原体丝状亚种(Mycoplasma mycoide subsp.mycoides,Mmm)P0071蛋白的单克隆抗体及其应用，还公开了分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法。所述的单克隆抗体是由保藏编号为CGMCC No：22309的杂交瘤细胞株3C4A1分泌产生。实验证明，该杂交瘤细胞株3C4A1分泌的抗体能与Mmm发生抗原抗体反应，而与山羊支原体山羊肺炎亚种、牛鼻支原体、无乳支原体和牛支原体等其他支原体病原不发生反应，具有很高的特异性。本发明的单克隆抗体可用于制备丝状支原体丝状亚种抗原检测和抗体检测试剂盒，也可以用于丝状支原体丝状亚种的免疫学分析，为建立快速准确的牛传染性胸膜肺炎检测和诊断试剂盒开发提供了物质基础。

技术领域

本发明涉及一株抗丝状支原体丝状亚种P0071蛋白的单克隆抗体、还涉及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株以及该单克隆抗体在检测丝状支原体丝状亚种中的应用。本发明属于生物技术领域。

背景技术

由丝状支原体丝状亚种(Mycoplasma mycoide subsp.mycoides)引起的牛传染性胸膜肺炎(Contagious Bovine Pleuropneumonia,CBPP)，又称为牛肺疫，是一种对牛危害严重的高度接触性传染病，可通过感染牛和易感牛的直接接触发生传播。因其具有高发病率和死亡率，被OIE列为A类传染病。

CBPP在新疫区常以暴发方式流行，导致高达100％的发病率和近60％的死亡率，之后发病率逐渐降低，转变为隐性或者慢性感染；带菌牛以及病牛是该病的主要传染源。丝状支原体丝状亚种可以通过病牛呼出或咳嗽喷出的飞沫、鼻腔分泌物、粪便和尿液等传播，也可通过病原污染的饲料、饮水等经口传播。成年牛感染后表现为发烧、呼吸窘迫、呼吸困难、咳嗽和鼻分泌物增多等呼吸道症状；而年轻患病犊牛则出现关节肿胀(关节炎)而不表现呼吸道症状。然而，许多呼吸道的细菌和病毒感染会出现类似的呼吸道症状，例如牛支原体、牛结核杆菌、巴氏杆菌和流感病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等。因此，仅从临床特征很难区分不同的病原体与丝状支原体丝状亚种。

CBPP于16～20世纪在世界范围内广泛分布，给全球养牛业造成重大经济损失。本病于1919年上海由澳大利亚引进奶牛时传入我国，在我国流行长达70年之久，给国民经济造成巨大损失。我国通过研制有效的弱毒疫苗及采取严格的防治措施，自1989年后再也没有发现临床病例。因为基础设施薄弱以及经济科技发展迟缓等原因，CBPP目前在我国毗邻的东南亚地区和非洲仍在流行，特别是在热带和亚热带地区(非洲西部，中部，东部，南部和其他非洲部分地区)。在过去的几十年中，非洲东部、南部和西非经历了CBPP的大规模流行。目前，它影响了非洲的27个国家，估计每年造成的损失达20亿美元。

我国已根除CBPP多年，目前尚未发现病例，但因我国牛群已停止疫苗免疫30余年，全部牛群都对CBPP易感。随着国内外经济贸易往来加剧，再加上该病在我国邻国仍在流行，传入我国的风险极高。因此，对CBPP的早期诊断与广泛监测显得尤为重要。感染早期，若能在牛群中及时准确地检测出CBPP病原并采取防控措施，可大大降低CBPP流行和暴发的风险。

目前我国尚没有CBPP病原和抗体检测试剂盒，CBPP的诊断以实验室诊断为主，包括病原分离培养、分子生物学检测及抗体检测等。其中病原分离培养是CBPP鉴别诊断的金标准，但是分离培养困难、周期长，操作需要生物安全四级实验室和一定的专业技术，不能满足临床快速诊断的需要。分子生物学方法存在假阳性或假阴性结果，需要特殊的仪器设备，多用于实验室研究，难以在基层推广应用。酶联免疫吸附法(ELISA)具有简单、快速、高通量等优点，但存在敏感性低、交叉反应强等特点。而特异性强的单克隆抗体，可以克服上述缺陷，是建立快速准确的抗原抗体检测方法必不可少的前提。因此，迫切需要制备一种特异性强的丝状支原体丝状亚种单克隆抗体，研发符合我国CBPP疫情防控需求的检测试剂盒。

发明内容

针对目前CBPP检测方法存在的不足，本发明的目的之一在于提供一种单克隆抗体，用于CBPP病原丝状支原体丝状亚种的特异性检测。