[发明专利]基于木霉-芽孢杆菌顺序接种共生培养发酵液的生物种衣剂及其制备方法

权利要求书

1.一种基于木霉-芽孢杆菌顺序接种共生培养发酵液，其特征在于，所述木霉接种量为总发酵量的1-2％v/v，先单一接种木霉，并在25℃-28℃培养35-45小时，再接种芽孢杆菌，接种量为总发酵量的2.0-3.0％v/v，28-30℃共培养48小时。

2.一种生物种衣剂，其特征在于，所述生物种衣剂包括如权利要求1所述的基于木霉-芽孢杆菌顺序接种共生培养发酵液。

3.根据权利要求2所述的生物种衣剂，其特征在，所述木霉-芽孢杆菌共生培养发酵液的标志物丙甲菌素含量为0.04-0.05μg/L，吲哚乙酸含量为900-1000μg/L，木霉孢子含量为1.0-9.0×10⁸cfu/L，芽孢杆菌孢子含量为1.0-9.0×10⁹cfu/L。

4.根据权利要求2所述的生物种衣剂，其特征在于，所述生物种衣剂采用干粉型。

5.根据权利要求2所述的生物种衣剂，其特征在于，包括木霉-芽孢杆菌共生培养菌物、硅藻土和芸苔素内酯组分，具体如下：

木霉-芽孢杆菌共生培养菌物：20％-30％w/w

硅藻土：40-60％w/w

芸苔素内酯：12％-20％w/w，所述芸苔素内脂为0.1％可溶液。

6.一种如权利要求2-5中任意一项所述的生物种衣剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S1.制备木霉-芽孢杆菌共生发酵液；

步骤S2.制备木霉-芽孢杆菌共生发酵液与硅藻土混合和芸苔素内酯混合；

步骤S3.检测粉剂型种衣剂质量。

7.根据权利要求6所述的生物种衣剂的制备方法，其特征在于，所述木霉菌株为深绿木霉菌SG3403，所述芽孢菌株为枯草芽孢杆菌B22。

8.根据权利要求6所述的生物种衣剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，具体操作如下：

将木霉菌株接种在PDA培养基中，在28℃条件下培养5天后，利用5mm打孔器打孔，接种于PD培养基中，在PD培养基28℃培养3天，木霉种子液接种于发酵罐共生培养基中发酵，发酵35-45小时，将芽孢杆菌接种在LBA培养基中，在30℃条件下培养2天后，利用5mm打孔器打孔，接种于LB培养基中，在LB培养基培养2天，接种于已具有木霉发酵液的共生培养基,再发酵45-50h。

9.根据权利要求8所述的生物种衣剂的制备方法，其特征在于，所述发酵罐的共生培养基为：20g/L糖蜜、20g/L酵母浸出粉、20g/L玉米粉，pH由氢氧化钠标定至5.8～6.0。

10.根据权利要求8所述的生物种衣剂的制备方法，其特征在于，所述木霉接种量为总发酵量的1.0-2.0％，芽孢杆菌接种量为总发酵量的2.0-3.0％；

下罐时溶氧反弹为发酵起始值的100％，pH为7.3，转速120rpm，共发酵时间为45-50h，芽孢杆菌孢子形成85％，木霉菌厚垣孢子形成90％；

利用木霉-芽孢共同发酵模式，其共生种种衣剂拮抗和促生评价指标为，木霉厚垣孢子含量为1.0-2.0×10⁸cfu/g，芽孢杆菌孢子含量为3.0-5.0×10⁹cfu/g，作为抗菌肽的丙甲菌素0.1-0.5μg/g，吲哚乙酸含量2000-2500μg/g。