[发明专利]一种人类骨髓、脐带血干细胞处理试剂盒及干细胞分离方法

说明书

本发明公开了一种人类骨髓、脐带血干细胞处理试剂盒，所述的干细胞处理试剂盒由1号液、2号液组成，所述百分比(％)均为重量百分比(W/W)，密度单位：g/ml，1号液、2号液的溶剂均为水；1号液：0.1％‑30％羟乙基淀粉或0.1％‑30％甲基纤维素；2号液：由聚蔗糖和泛影葡胺配制成的密度为1.0‑1.2g/ml的分层液组成。在本发明实施过程中，能够缩短反应时间，且本方案中所用的试剂更少，所得到的干细胞数量更多。

技术领域

本发明属于生物医学技术应用技术领域，具体为一种人类骨髓、脐带血干细胞处理试剂盒及干细胞分离方法。

背景技术

现有技术中，用于人类血液细胞分离的方法包括免疫磁珠法、流式细胞仪法、血细胞分离机法和培养扩增法等方法。

免疫磁珠法

将已知的抗体包被在磁珠微粒上，使磁珠微粒与人类血液混合。呈抗原抗体阳性的细胞粘附在磁珠上，通过一条磁性管道，磁珠被吸附在管壁上；其它没有结合磁珠的细胞都流走后，去除管道磁性，搜集所有含有磁珠的细胞。存在问题：造价高，中低收入患者不适用。对细胞本身活性有损伤，影响细胞治疗疗效。

流式细胞仪法

分选原理：流式细胞计的分选功能是由细胞分选器完成的。

总的过程：由喷嘴射出的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液体被当作废液抽吸掉，某些类型的仪器也有采用捕获管来进行分选的。存在问题，一台流式细胞仪造价300-500万元，标记用抗体1500-5000元一支，造价高，标记物有致癌性，应用于临床不安全，只能适用于科研。

血细胞分离机法

主要用于分离外周血，先给患者注射动员剂，然后使患者外周血经过血细胞分离机循环过滤，得到一定范围直径的细胞，用于细胞治疗。存在问题：打动员剂增加治疗负担，分离后细胞液体积过大，患者承担一定的生命危险。

培养扩增法

采集人类血液后，加入试剂置于培养箱扩增，1周后清洗使用。存在问题：污染率高，干细胞向未知方向分化为未知干细胞，时间长。

现有技术中，已经公开的涉及骨髓和血液分离专利文献：

申请号：200510130326.7，名称：一种分离细胞的方法及专用细胞分离液。该分离细胞的方法缺点：上述方法针对鸡，牛，人血液需要做各种调整，准确度堪忧，由于添加了表面活性剂，分离出的细胞未知，只能用于简单的细胞试验使用。

申请号：200610035900.5，名称：一种干细胞分离液及其用于干细胞分离的方法。该干细胞分离液和干细胞分离的方法的缺点：需要配制工作液，需要调节密度，只能搜集密度在1.083g/ml范围内的细胞，即搜集到的细胞较杂，而可用于治疗所需要的目标细胞数量少，并且对于脐带血来说，使用该方法去除红细胞不净，最终临床应用的时候会导致患者产生排异反应。

申请号：200610114475.9名称：用于分离骨髓单个核细胞的试剂盒：使用该试剂盒的缺点：使用该试剂盒直接分离血液中的干细胞，数量不足以临床治疗使用，所以该方法进行了细胞培养，培养的细胞污染率高，体外模拟体内环境使细胞扩增，导致培养出的细胞有形态没功能，不能用于临床治疗。

申请号：200610106875.5名称：一种有核细胞体外分离试剂盒及其应用方法。缺点：此试剂盒及其应用方法所用的HISTOPAGUE 1077为密度1.077g/ml的淋巴细胞分离液，经此分离后的细胞绝大多数为淋巴细胞，这样导致细胞中能够用于治疗的干细胞占少数，影响临床疗效。