[发明专利]ETV4基因在重编程增生性瘢痕成纤维细胞中的应用

权利要求书

1.ETV4基因在重编程增生性瘢痕成纤维细胞中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述重编程增生性瘢痕成纤维细胞的方法是：

步骤1：取新鲜的人增生性瘢痕标本，进行组织消化，分离获取增生性瘢痕成纤维细胞；

步骤2：将如SEQ ID No.1所示的人ETV4基因CDS区编码序列连接至pCDH质粒载体上，获取pCDH-ETV4过表达质粒并进行扩增；

步骤3：将目的基因ETV4质粒、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染HEK 293T细胞，收集病毒上清，浓缩后，获得慢病毒悬液；

步骤4：取步骤1的增生性瘢痕成纤维细胞，培养传至第3代，得到P3代增生性瘢痕成纤维细胞，待细胞融合至70％-80％，用步骤3的慢病毒悬液进行感染，72h后，即得到经过ETV4基因重编程的增生性瘢痕成纤维细胞。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤1中，所述组织消化的具体方法是：取新鲜的人增生性瘢痕标本，用无菌PBS清洗后剪成细条状，放入质量百分数为0.25％的中性蛋白酶溶液中，置于37℃孵育2h后分离表皮与真皮；取真皮组织剪碎呈泥状，加入到10倍体积的质量百分数为0.2％的I型胶原酶溶液中，置于37℃摇床中，采用转速为80rpm-100rpm，孵育2h，即得。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤1中，所述分离是采用70μm滤网过滤后，300g离心5min，加入5mL含10％胎牛血清的DMEM低糖培养基重悬，接种于细胞培养皿内，在37℃，5％CO₂培养箱中培养。