[发明专利]一种靶向性双展示噬菌体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种靶向性双展示噬菌体，其特征在于，利用噬菌体展示技术将编码P53蛋白N端表位多肽SV及DP分别定向克隆到丝状噬菌体的PIII及PVIII基因中，制备出尾部PIII蛋白展示肽SV、背部PVIII蛋白展示肽DP的靶向性双展示噬菌体phage-SV-DP；所述SV的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述DP的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

2.根据权利要求1所述的一种靶向性双展示噬菌体的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)构建重组噬菌体载体fADL-le-SV

(1)BglI酶切载体fADL-le，获得酶切后的载体fADL-le；

(2)合成P53蛋白N端表位多肽SV；

(3)将步骤(1)酶切后的载体fADL-le与步骤(2)合成的SV连接，转化，筛选阳性克隆，获得重组噬菌体载体fADL-le-SV；

2)构建重组噬菌体载体fADL-le-SV-DP

以构建好的噬菌体载体fADL-le-SV为模板，利用点突变试剂盒将肽DP定向克隆到噬菌体的PVIII基因中，构建获得重组噬菌体载体fADL-le-SV-DP；

3)制备噬菌体phage-SV-DP

(1)将转化有重组噬菌体载体fADL-le-SV-DP的菌株接种到含有Kar⁺的LB液体培养基中，37℃剧烈震荡10h；

(2)8000rpm，10min，4℃，留上清；

(3)加入六分之一体积的PEG/NaCl溶液，涡旋，4℃过夜；

(4)12000rpm离心15min，用1ml TBS溶解噬菌体沉淀；

(5)将溶液转移至1.5ml EP管中，14000rpm离心1min，小心将上清转移至1.5ml EP管中，每个EP管中加入150μl PEG/NaCl，混匀后4℃过夜；

(6)14000rpm离心15min，用100μl TBS溶解噬菌体沉淀，4℃冰箱保存。

3.权利要求1或2所述的靶向性双展示噬菌体在检测血清P53抗体中的应用。