[发明专利]一种靶向性三展示噬菌体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种靶向性三展示噬菌体及其制备方法和应用，属于DNA重组技术领域。本发明公开的一种靶向性三展示噬菌体，利用噬菌体展示技术将编码P53蛋白N端表位多肽SV、MP及DE分别定向克隆到丝状噬菌体的PIII、PVIII及PVI基因中，制备出PIII蛋白展示肽SV、PVIII蛋白展示肽MP及PVI蛋白展示肽DE的靶向性三展示噬菌体phage‑SV‑MP‑DE。该噬菌体作为一种新型生物制品，具有特异性强、灵敏度高、制备简单、成本低廉等优点，能够应用于肿瘤患者血清P53抗体的检测。

技术领域

本发明涉及DNA重组技术领域，更具体的说是涉及一种靶向性三展示噬菌体及其制备方法和应用。

背景技术

癌症是威胁人类健康的主要杀手，在我国每年癌症发病人数约260万，死亡约180万。导致这一现象的原因很多，其中一个重要的原因是目前人类还不能对肿瘤的发生发展过程进行有效的诊断，尤其是早期诊断。

p53是一种抑癌基因，其蛋白对维持正常的细胞分裂与生长起重要的调节作用，但是一旦该基因发生突变，其编码的突变蛋白半衰期延长，失去抑癌作用，积累于细胞内并刺激免疫系统产生P53抗体。研究表明，血清P53抗体可以作为一种广谱性的肿瘤标志物用于肿瘤早期检测和肿瘤高危人群的筛查。

目前，血清P53抗体的检测主要以重组P53蛋白为基础开展，而蛋白的制备及纯化具有操作繁琐、费时、价格相对昂贵且灵敏度低等缺点。

因此，提供一种靶向性三展示噬菌体及其制备方法和应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种能够用于肿瘤患者血清P53抗体检测的靶向性三展示噬菌体，该噬菌体作为一种新型生物制品具有特异性强、灵敏度高、制备简单、成本低廉等优点。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种靶向性三展示噬菌体，利用噬菌体展示技术将编码P53蛋白N端表位多肽SV、MP及DE分别定向克隆到丝状噬菌体的PIII、PVIII及PVI基因中，制备出PIII蛋白展示肽SV、PVIII蛋白展示肽MP及PVI蛋白展示肽DE的靶向性三展示噬菌体phage-SV-MP-DE；所述SV的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述MP的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述DE的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示。

进一步，所述的一种靶向性三展示噬菌体的制备方法，具体步骤如下：

1)构建重组噬菌体载体fADL-le-SV

(1)BglI酶切载体fADL-le，获得酶切后的载体fADL-le；

(2)合成P53蛋白N端表位多肽SV；

(3)将步骤(1)酶切后的载体fADL-le与步骤(2)合成的SV连接，转化，筛选阳性克隆，获得重组噬菌体载体fADL-le-SV；

2)构建重组噬菌体载体fADL-le-SV-MP

以构建好的噬菌体载体fADL-le-SV为模板，利用点突变试剂盒将肽MP定向克隆到噬菌体的PVIII基因中，构建获得重组噬菌体载体fADL-le-SV-MP；

3)构建重组噬菌体载体fADL-le-SV-MP-DE

以构建好的噬菌体载体fADL-le-SV-MP为模板，利用点突变试剂盒将肽DE定向克隆到噬菌体的PVI基因中，构建获得重组噬菌体载体fADL-le-SV-MP-DE；

4)制备噬菌体phage-SV-MP-DE

(1)将转化有重组噬菌体载体fADL-le-SV-MP-DE的菌株接种到含有Kar⁺的LB液体培养基中，37℃剧烈震荡10h；