[发明专利]β-烟酰胺单核苷酸的化学合成方法

权利要求书

1.一种β-烟酰胺单核苷酸的化学合成方法，其特征在于，包括：以1,2,3,5-四苯甲酰氧基-2-C-甲基-beta-D-呋喃核糖和烟酰胺为起始原料，依次经缩合反应、脱苯甲酰基保护基和磷酸化反应，制得β-烟酰胺单核苷酸。

2.根据权利要求1所述的β-烟酰胺单核苷酸的化学合成方法，其特征在于，所述缩合反应的温度为40-50℃。

3.根据权利要求1或2所述的β-烟酰胺单核苷酸的化学合成方法，其特征在于，所述缩合反应在第一溶剂和催化剂下进行，所述第一溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、三氯甲烷、二甲基亚砜、丙酮中的至少一种，优选二氯甲烷和/或四氢呋喃；所述催化剂选自三氟甲磺酸、甲苯磺酸或三氟甲磺酸三甲基硅脂，优选三氟甲磺酸；

或，所述1,2,3,5-四苯甲酰氧基-2-C-甲基-beta-D-呋喃核糖、烟酰胺和催化剂的摩尔比为1：(1.5-1.6)：(2.0-2.1)；

或，所述第一溶剂的用量(ml)为1,2,3,5-四苯甲酰氧基-2-C-甲基-beta-D-呋喃核糖质量(g)的5-6倍。

4.根据权利要求1所述的β-烟酰胺单核苷酸的化学合成方法，其特征在于，所述脱苯甲酰基保护基的温度为35-40℃。

5.根据权利要求4所述的β-烟酰胺单核苷酸的化学合成方法，其特征在于，所述脱苯甲酰基保护基在第二溶剂和有机碱下进行，所述第二溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇中的至少一种，优选乙醇；所述有机碱选自三乙胺、甲醇钠、乙醇钠或叔丁基醇钾，优选三乙胺；

或，所述有机碱与1,2,3,5-四苯甲酰氧基-2-C-甲基-beta-D-呋喃核糖的摩尔比为(2.5-3)：1；

或，将所述缩合反应的产物溶于第二溶剂中，加入有机碱，控制加料速度使体系温度不超过-5℃。

6.根据权利要求1所述的β-烟酰胺单核苷酸的化学合成方法，其特征在于，所述磷酸化反应的温度为-5-0℃。

7.根据权利要求6所述的β-烟酰胺单核苷酸的合成方法，其特征在于，所述磷酸化反应采用的磷酸化试剂为磷酸三甲酯和三氯氧磷。

8.根据权利要求1-7任一项所述的β-烟酰胺单核苷酸的化学合成方法，其特征在于，所述方法还包括对所述磷酸化反应的产物进行阴离子交换树脂脱盐纯化。

9.根据权利要求8所述的β-烟酰胺单核苷酸的化学合成方法，其特征在于，先用水洗，收集水洗液，再用1-10％CF₃COOH洗脱，收集洗脱液，合并水洗液和洗脱液，冻干得到高纯度β-烟酰胺单核苷酸。

10.根据权利要求1-9任一项所述的β-烟酰胺单核苷酸的化学合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)缩合反应：将1,2,3,5-四苯甲酰氧基-2-C-甲基-beta-D-呋喃核糖、烟酰胺和催化剂溶于第一溶剂中，在40-50℃下反应1-3h，降至室温，加入甲醇淬灭反应，减压脱除溶剂，得到烟酰胺三苯甲酰基核苷；

(2)脱苯甲酰基保护基：将步骤(1)所得烟酰胺三苯甲酰基核苷溶于第二溶剂中，在-10～-5℃下加入有机碱，控制加料速度使体系温度不超过-5℃，然后升温至35-40℃反应2-3h，滴加稀盐酸使体系显中性，加入甲基叔丁基醚，在0℃析出固体，过滤，得到烟酰胺核苷盐；

(3)磷酸化反应：在-5-0℃下，向步骤(2)所得烟酰胺核苷盐中滴加三氯氧磷和磷酸三甲酯的混合液，保持温度反应1-2小时，反应完毕转室温，加入冰水淬灭反应，乙酸乙酯萃取有机相，浓缩，得到β-烟酰胺单核苷酸粗品；

(4)脱盐纯化：将步骤(3)所得β-烟酰胺单核苷酸粗品溶于水中，用DD2离子树脂进行吸附，先用水洗，收集水洗液，再用5％CF₃COOH洗脱，收集洗脱液，合并水洗液和洗脱液，冻干得到β-烟酰胺单核苷酸。