[发明专利]一种检测SARS-CoV-2 RNA的探针组、ECL生物传感器及其制备方法和应用在审
申请号: | 202110713513.7 | 申请日: | 2021-06-25 |
公开(公告)号: | CN113403369A | 公开(公告)日: | 2021-09-17 |
发明(设计)人: | 张凯;范振强;丁月娣;谢敏浩 | 申请(专利权)人: | 江苏省原子医学研究所 |
主分类号: | C12Q1/682 | 分类号: | C12Q1/682;C12Q1/6825;C12Q1/70;G01N21/76 |
代理公司: | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人: | 安志娇 |
地址: | 214063 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 sars cov rna 探针 ecl 生物 传感器 及其 制备 方法 应用 | ||
1.探针组,包括核苷酸序列如SEQ ID:NO.1所示的发夹探针;核苷酸序列如SEQ ID:NO.2所示的发夹探针;核苷酸序列如SEQ ID:NO.3所示的发夹探针。
2.试剂盒,包括权利要求1所述探针组,各条探针独立包装。
3.一种检测SARS-CoV-2RNA的系统,其特征在于,包括权利要求1所述的探针组、ECL生物传感器和CRISPR/Cas12a系统。
4.根据权利要求3所述的系统,其特征在于,所述CRISPR/Cas12a系统包括CRISPR-Cas12a蛋白和核苷酸序列如SEQ ID:NO.4所示的gRNA。
5.根据权利要求3或4所述的系统,其特征在于,ECL生物传感器的制备方法包括如下步骤:
1)将Nafion通过静电吸附修饰GCE,得到Nafion/GCE;
2)将金属-有机框架材料通过静电吸附作用修饰到Nafion/GCE上,得到Ru-PEI/Au@ZIF-8/Nafion/GCE;
3)将C3N4修饰到Ru-PEI/Au@ZIF-8/Nafion/GCE上,得到ECL生物传感器。
6.根据权利要求5所述的系统,其特征在于,所述金属-有机框架材料为zif-8可选的,所述金属-有机框架材料为金掺杂、修饰了自增强钌复合物的ZIF-8。
7.权利要求5或6中所述方法制备得到的ECL生物传感器。
8.一种检测SARS-CoV-2的方法,其特征在于,包括使用权利要求3-7任一所述的检测SARS-CoV-2RNA的系统检测SARS-CoV-2RNA的步骤。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,具体包括如下步骤:
1)含有Mg2+、DSN和H1发夹探针的溶液与不同浓度的待测溶液在60±5℃下反应75分钟以上,得到反应液1;H1发夹探针的核苷酸序列如SEQ ID:NO.1所示;
2)使DSN酶失活,得到反应液2;
3)将等摩尔的H2发夹探针和H3发夹探针依次加入反应液2中;在4℃下保持16小时以上,得到含有H2/H3双链的反应液3;H2发夹探针的核苷酸序列如SEQ ID:NO.2所示;H3发夹探针的核苷酸序列如SEQ ID:NO.3所示;
4)将Cas12a蛋白、gRNA和反应液3混合,室温孵育,得到反应液4;gRNA的核苷酸序列如SEQ ID:NO.4所示;
5)将Fc标记的DNA探针加入反应液4中,反应,得到最终反应溶液;DNA探针的核苷酸序列如SEQ ID:NO.9所示;
6)将最终反应溶液滴加到权利要求3-5中任一所述的ECL生物传感器表面。
10.权利要求1所述的探针组、权利要求2所述试剂盒、权利要求3-7任一所述系统在检测SARS-CoV-2RNA中的应用。
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