[发明专利]抗H5亚型禽流感病毒新纳米抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗H5亚型禽流感病毒新纳米抗体及其应用，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。并将抗体基因通过连接肽与麦芽糖结合蛋白(MBP)基因连接，构建表达载体，诱导融合蛋白表达，来促进抗H5禽流感病毒纳米抗体融合蛋白在表达系统中的可溶表达，从而解决了抗H5禽流感纳米抗体蛋白在原核系统呈不可溶的难题，提高了准确性和重复性。可用于探测、诊断、预防或治疗禽流感病毒，特别是H5亚型禽流感病毒。对鸡H5禽流感的监测具有重大的意义。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种抗H5亚型禽流感病毒新纳米抗体及其应用。

背景技术

禽流感病毒(AIV)属于正黏病毒科正黏病毒属，是一类有包膜的单股负链分节段RNA病毒，根据流感病毒核衣壳蛋(NP)和基质蛋白(M)的不同分为A、B和C型，国内又称甲、乙和丙型。根据血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原性差异，甲型流感病毒可分为不同的亚型。到目前为止，已有17种抗原上不同的甲型流感血凝素亚型，它们被进一步归类为第一组或第二组血凝素(第一组：H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16和H17病毒；第二组：H3、H4、H7、H10、H14、H15病毒)。

血凝素(HA)作为一种糖蛋白三聚体存在于细胞表面流感病毒粒子的表面。每个HA单体最初表达为HA0，随后被宿主蛋白酶裂解成HA1和HA2亚基，通过二硫键连接。HA可分为球状头(HA1)和茎(部分HA1与全部HA2)两个区域，头部HA1相对茎部HA2较为容易发生突变，头部区域包含调节病毒与宿主底物结合能力的受体结合位点，针对该区域的抗体可以阻断受体结合，并被认为具有中和作用。而茎部相对保守，针对柄的抗体更可能存在交叉反应，因此茎部是广谱中和抗体的潜在靶点。

H5是由甲型流感病毒引起的一种禽类烈性传染病，我国将其列为一类动物疫病，其潜伏期短，发病急剧，发病率和死亡率高。甲型流感病毒由8个基因节段构成，当不同的流感感染同一个细胞时会出现基因节段随机交换重组，也叫重配，导致流感抗原性转变，出现新的亚型和致病力的改变。近5年来，H5亚型AIV的基因分化速度快，出现多个亚分支，增加了与其他亚型发生重配的概率。而高致病性病毒是源于低致病性病毒，病毒在不断进化和广泛传播，研制H5流感病毒检测设备和检测方法具有重要意义。在流感病毒发生快速、准确地诊断其亚型，大量研究报道了各种检测流感病毒的方法，比如病毒分离、免疫荧光、聚合酶链式反应(PCR)、酶染免疫吸附试验(ELISA)和血清学方法，然而这些方法费时费力，需要实验室设备以外花费还较高。例如，病毒分离被认为是诊断的金标准，也是常规的快速实验室确认人流感必不可少的，但它往往需要5～7天的测试与劳动密集型和长程序；而分子检测方法PCR、实时PCR等费时且技术要求高，而且样品间的交叉污染可能导致假阳性结果。

抗体介导的免疫检测因其简便而成为一种流行的检测方法，多克隆抗体容易产生交叉反应导致亚型判断错误，单克隆抗体开发周期长、稳定性差，价格不菲，若动物源的抗体在人体治疗上则很可能引起人体的免疫反应；核糖体展示技术的稳定性问题使得特异性和高亲和力、体积小的抗体难以获得。趋向于小型化的抗体——纳米抗体(Nbs)能避开上文提到的诸多不足，在食品、环境、化学检测上的运用逐年呈现上升趋势。