[发明专利]一种提高时间分辨荧光信号强度的标记方法及应用在审
| 申请号： | 202110715114.4 | 申请日： | 2021-06-26 |
| 公开（公告）号： | CN113533272A | 公开（公告）日： | 2021-10-22 |
| 发明（设计）人： | 金仁耀;翟璐;杨加成 | 申请（专利权）人： | 浙江工商大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N21/01;G01N33/533 |
| 代理公司： | 杭州天昊专利代理事务所(特殊普通合伙) 33283 | 代理人： | 向庆宁;卓彩霞 |
| 地址： | 310000 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 时间 分辨 荧光 信号 强度 标记 方法 应用 | ||
1.一种提高时间分辨荧光信号强度的标记方法，其特征是，包括以下步骤：
(1)称取4-7mg 2-S-(4-氨基苯)-1，4，7三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸，溶解于1mL0.01mol·L-1、pH7.4的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液，制得NOTA螯合剂溶液，此溶液为A液；
(2)向A液中加入500-700μL 20mmol·L-1的戊二醛溶液，室温避光反应过夜，此溶液为B液；
(3)称取20-30mg纯化后的单克隆抗体冻干粉，溶解于3ml HEPES溶液(0.01mol·L-1，pH7.4)，室温下磁力搅拌混匀，此为C液；
(4)将B液逐滴加入C液中，然后调节pH值至9.0，后在4℃下避光搅拌反应4-6h，此为D液；
(5)将D液装入截留分子量为8KDa的透析袋中，HEPES溶液透析，每隔4h换液1次，共换液4-6次，后吸取透析袋中的反应液，此为E液；
(6)称取0.11-0.15g EuCl3·6H2O，用5-10mL超纯水配成EuCl3溶液，此为F液；
(7)取200-400μL F液加入E液中，室温避光反应4-6h后置于截留分子量为8KDa的透析袋中透析，每隔4h换液1次，共换液4-5次，再用30KDa的超滤离心管7000-9000rpm离心3-5次，用5-10ml的0.01mol·L-1，pH7.4的HEPES溶液复溶，所制备的反应液为喹乙醇时间分辨荧光免疫标记抗体复合物。
2.根据权利要求1所述的一种提高时间分辨荧光信号强度的标记方法，其特征是，所述单克隆抗体为喹乙醇单克隆抗体或者庆大霉素单克隆抗体。
3.一种提高喹乙醇时间分辨荧光信号强度的标记方法，其特征是，包括以下步骤：
(1)称取4-7mg 2-S-(4-氨基苯)-1，4，7三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸，溶解于1mL0.01mol·L-1、pH7.4的4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液，制得NOTA螯合剂溶液，此溶液为A液；
(2)向A液中加入500-700μL 20mol·L-1的戊二醛溶液，室温避光反应过夜，此溶液为B液；
(3)称取20-30mg纯化后的喹乙醇单克隆抗体冻干粉，溶解于3ml HEPES溶液(0.01mol·L-1，pH7.4)，室温下磁力搅拌混匀，此为C液；
(4)将B液逐滴加入C液中，然后调节pH值至9.0，后在4℃下避光搅拌反应4-6h，此为D液；
(5)将D液装入截留分子量为8KDa的透析袋中，HEPES溶液透析，每隔4h换液1次，共换液4-6次，后吸取透析袋中的反应液，此为E液；
(6)称取0.11-0.15g EuCl3·6H2O，用5-10mL超纯水配成EuCl3溶液，此为F液；
(7)取200-400μL F液加入E液中，室温避光反应4-6h后置于截留分子量为8KDa的透析袋中透析，每隔4h换液1次，共换液4-5次，再用30KDa的超滤离心管7000-9000rpm离心3-5次，用5-10ml的0.01mol·L-1，pH7.4的HEPES溶液复溶，所制备的反应液为喹乙醇时间分辨荧光免疫标记抗体复合物。
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