[发明专利]一种与仔猪C型产气荚膜梭菌感染性腹泻相关的ssc-miR-122-5p及其应用

说明书

本发明公开了一种与仔猪C型产气荚膜梭菌感染性腹泻相关的ssc‑miR‑122‑5p，该ssc‑miR‑122‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了用于检测所述的ssc‑miR‑122‑5p的表达量的特异性引物，其序列如SEQ ID NO.2所示。本发明公开了一种通过干扰ssc‑miR‑122‑5p从而提高仔猪抵抗C型产气荚膜梭菌感染的方法。本发明首次发现ssc‑miR‑122‑5p在仔猪C型产气荚膜梭菌感染性腹泻的回肠组织中显著高表达，然后以IPEC‑J2细胞为研究对象，通过过表达和干扰ssc‑miR‑122‑5p研究其对CPB2毒素诱导IPEC‑J2细胞损伤的影响，以期阐明ssc‑miR‑122‑5p参与调控C型产气荚膜梭菌感染致腹泻过程中的作用机制，为仔猪的细菌性腹泻的分子育种提供有力的科研借鉴。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种与仔猪C型产气荚膜梭菌感染性腹泻相关的ssc-miR-122-5p及其应用。

背景技术

目前，C型产气荚膜梭菌已成为现代养殖业中多种畜禽肠道感染的主要原因，尤其对于一周龄以内的仔猪而言，可引起出血性腹泻，随后细菌及毒素又进入全身循环系统，导致多器官衰竭，最终造成机体死亡。据统计C型产气荚膜梭菌引起的仔猪腹泻患病率和病死率均可高达100%。目前已通过抗生素、疫苗等手段降低了仔猪腹泻的发生率，而且随着抗生素的过度使用，不仅改变了仔猪肠道粘膜层结构，损伤肠道屏障，影响了仔猪的正常生长，而且药物残留等降低了猪肉产品的质量，进一步危害了人类健康，同时，耐药菌的出现也加大了防治仔猪腹泻的难度。由此可见，单纯依赖疫苗和抗生素等防治仔猪腹泻是治标不治本的，而且随着养猪产业逐步实施“减抗、禁抗”的政策，使得仔猪腹泻的防治成为一项难度较大的挑战。因此，从遗传本质上提高仔猪对C型产气荚膜梭菌的抵抗力，培育出具有抗腹泻能力的新品系（种），是解决仔猪腹泻的有效途径。因此，分析探讨猪肠上皮细胞在C型产气荚膜梭菌产生的毒素侵染过程的炎症损伤机理，对于寻求控制和减少仔猪腹泻发病率及严重程度的分子靶标具有重要意义。

miRNA是一类长度约为22个核苷酸的内源性单链小分子RNA，不编码蛋白，但可通过其种子序列与靶基因3′-UTR区特异性配对，介导靶基因降解或阻遏翻译，从而调控靶基因表达。据报道，miRNA参与各种细胞生理和病理过程，例如细胞增殖、分化、凋亡以及免疫炎症反应等。王鹏飞等在仔猪感染C型产气荚膜梭菌前后的仔猪回肠组织检测分析到大量的差异表达miRNAs，并且多数miRNAs具有较高的保守性。但目前，关于miRNA在仔猪的细菌性感染性腹泻中的作用机制研究较少。

发明内容

本发明提供一种与仔猪C型产气荚膜梭菌感染性腹泻相关的ssc-miR-122-5p及其应用，

在感染C型产气荚膜梭菌过程中可调控猪肠上皮细胞的凋亡和损伤的小分子RNA，将其应用到仔猪抗腹泻育种中。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种与仔猪C型产气荚膜梭菌感染性腹泻相关的ssc-miR-122-5p，所述ssc-miR-122-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

另一方面，本发明用于扩增所述的ssc-miR-122-5p表达量检测的荧光定量特异性引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

还有一方面，本发明提供了一种所述的ssc-miR-122-5p在仔猪C型产气荚膜梭菌感染性腹泻的抗病育种药物制备中的应用，具体方法如下：通过使用ssc-miR-122-5pinhibitor转染猪肠上皮细胞IPEC-J2，干扰ssc-miR-122-5p的表达，从而抑制CPB2毒素诱导IPEC-J2的细胞活力降低、细胞毒性和炎性因子分泌增加以及细胞通透性增大，缓解CPB2毒素诱导IPEC-J2细胞损伤。

本发明具有的有益效果：