[发明专利]一种萃取剂及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种萃取剂及其制备方法与应用，所述萃取剂包括A液和B液，所述A液为乙腈；所述B液以水为溶剂，包含铵盐。本发明的萃取剂只需通过一步操作即可有效降低阿尔兹海默症检测样本中高丰度蛋白的含量，同时不会造成目标成分损失，高丰度蛋白的去除率至少可以达到98％，样本经过该萃取试剂萃取后，可直接进行LC‑MS/MS定量，不需要其它额外操作步骤。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种萃取剂及其制备方法与应用。

背景技术

阿尔兹海默症(Alzheimer's disease，AD)是神经系统退行性疾病，伴有特殊病理和生化变化，是一种获得性、持续性及全面性的认知功能障碍的临床综合症。

相关技术表明，β-淀粉样蛋白(Aβ)是淀粉样蛋白前体(APP)经蛋白水解酶作用后的底物，由第21号染色体编码，是阿尔兹海默症的主要病理蛋白之一。APP被至少3种酶加工，其切割途径包括分泌酶途径I和分泌酶途径II。在分泌酶途径中，APP首先被β-分泌酶裂解，随后在γ-分泌酶作用下，被切割形成含有39-43个氨基酸的多肽。其中，Aβ1-42是最常见的亚型之一，由42-43个氨基酸组成的蛋白质片段，主要位于阿尔兹海默症患者的脑内。Aβ1-42多肽与阿尔兹海默症(AD)密切相关，是脑脊液和血浆中的关键生物标志物之一。由于临床样本(脑脊液)中Aβ1-42多肽的浓度极低，约400pg/mL同时容易发生容易聚集，且存在大量其它高丰度蛋白，严重干扰对Aβ1-42多肽的测定，导致对Aβ1-42多肽的检测难度极高，尚不能很好的应用于AD的临床诊断和早期筛查。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种萃取剂，能够用于阿尔兹海默症临床样本前处理，有效降低样本中高丰度蛋白含量。

本发明还提出一种具有上述萃取剂的应用。

根据本发明的一个方面，提出了一种萃取剂，包括A液和B液，所述A液为乙腈；所述B液以水为溶剂，包含铵盐。

在本发明的一些实施方式中，所述铵盐为氟化铵、甲酸铵、乙酸铵和碳酸氢铵中的一种。

在本发明的一些实施方式中，所述B液中铵盐的含量为1-50mmol/L。

在本发明的一些实施方式中，所述B液中铵盐的含量为10-30mmol/L。

在本发明的一些实施方式中，所述A液和B液的体积比为40～95：5～60。

本发明的第二方面提出了上述萃取剂的应用，所述萃取剂用于多肽萃取。

在本发明的一些实施方式中，所述萃取剂在制备阿尔兹海默症检测试剂中的应用。

在本发明的一些实施方式中，所述萃取剂用于Aβ1-42淀粉样多肽的萃取。

在本发明的一些实施方式中，所述萃取剂用于阿尔兹海默症样本中高丰度蛋白的去除。

根据本发明的实施方式的一种萃取剂，至少具有以下有益效果：本发明的萃取剂，只需通过一步操作即可有效降低阿尔兹海默症检测样本中高丰度蛋白的含量，同时不会造成目标成分损失，高丰度蛋白的去除率至少可以达到98％，样本经过该萃取试剂萃取后，可直接进行LC-MS/MS定量，不需要其它额外操作步骤。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明，其中：

图1为本发明测试例中的UPLC-MS/MS对Aβ1-42浓度进行测定的标准曲线图；

图2为本发明测试例中的ACSF蛋白质标准曲线图；

图3为本发明测试例中的采用实施例1-3制备的萃取剂萃取Aβ1-42多肽后样品溶液的UPLC-MS/MS特征图；