[发明专利]一种基于多重免疫组化技术的生物标志物分析方法及其应用

权利要求书

1.一种基于多重免疫组化技术的生物标志物分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：获取数据步骤，获取肿瘤组织样本中目标区域的组织形态学、细胞表型以及对应的坐标数据，记为标准数据S；

S2：提取关键信息列步骤，提取标准数据S中的组织形态学分类列、细胞表型列、以及X坐标列和Y坐标列；所述组织形态学分类列包括Tumor和non-Tumor，所述Tumor指肿瘤区，所述non-Tumor指非肿瘤区；

S3：识别肿瘤边界细胞步骤，通过Delaunay三角剖分算法构造Delaunay三角网，当其中任意两点之间的一端为肿瘤细胞，另一端为非肿瘤细胞，即识别为肿瘤边界细胞；

S4：提取肿瘤边界细胞步骤，将步骤S3中识别的肿瘤边界细胞提取作为子集，映射至坐标系中；

S5：定义肿瘤边缘细胞步骤，将步骤S4中提取的肿瘤边界细胞作为数据集A，将步骤S1中获取的标准数据S作为数据集B，基于欧几里得距离算法获取数据B在数据A自定义半径范围内的细胞索引值，根据细胞索引值确定肿瘤边缘细胞；

S6：注释细胞类型步骤，将肿瘤边缘细胞注释为“Margin”标签，将组织形态列为“Tumor”且非“Margin”细胞注释为“Intra”标签，其余注释为“Other”标签，并将注释列添加至标准数据S中；

S7：定量计算生物标志物步骤，通过计算双阳性细胞评分、肿瘤-免疫抑制相对距离比中至少一种生物标志物实现对肿瘤组织样本的分析；其中，所述双阳性细胞评分是指对两种特定标记物阳性的免疫效应细胞分别在“Margin”标签区域和“Intra”标签区域中的占比进行评分，具体是指对第一种特定标记物阳性的免疫效应细胞在“Margin”标签区域中的占比、在“Intra”标签区域中的占比，以及第二种特定标记物阳性的免疫效应细胞在“Margin”标签区域中的占比、在“Intra”标签区域中的占比进行评分；所述肿瘤-免疫抑制相对距离比是指计算在“Margin”标签区域和“Intra”标签区域中，免疫效应细胞与肿瘤细胞的相对距离和免疫效应细胞与免疫抑制细胞的相对距离的比值。

2.根据权利要求1所述基于多重免疫组化技术的生物标志物分析方法，其特征在于，所述双阳性细胞评分具体包括：分别计算CD8+、CD68+和CD11c+细胞中的任意两种免疫效应细胞分别在“Margin”标签区域和“Intra”标签区域中的占比，当超过预定细胞占比阈值时记1分，否则记0分，再将评分相加求和，得到双阳性细胞评分，分值为0~4分，分值越高说明这两种免疫效应细胞在“Margin”标签区域和“Intra”标签区域中的浸润程度越高；所述预定细胞占比阈值为1%~50%。

3.根据权利要求2所述基于多重免疫组化技术的生物标志物分析方法，其特征在于，所述免疫效应细胞包括CD8+、CD68+和CD11c+细胞中的至少一种；所述免疫抑制细胞包括FoxP3+、CD163+和CD11b+细胞中的至少一种。

4.根据权利要求3所述基于多重免疫组化技术的生物标志物分析方法，其特征在于，所述肿瘤-免疫抑制距离比具体包括：提取在“Margin”标签区域和“Intra”标签区域内的免疫效应细胞与肿瘤细胞、免疫效应细胞与免疫抑制细胞这两组细胞类型的数据集，基于欧几里得距离算法计算数据集的欧几里得距离矩阵，分别取欧几里得距离的中位值作为两个数据集的相对距离，计算免疫效应细胞与肿瘤细胞的相对距离和免疫效应细胞与免疫抑制细胞的相对距离的比值，比值大于1说明免疫效应细胞更靠近免疫抑制细胞，与免疫抑制细胞相互作用，比值小于1说明免疫效应细胞更靠近肿瘤细胞，与肿瘤细胞相互作用；其中，所述肿瘤细胞为PanCK+细胞。

5.根据权利要求1所述基于多重免疫组化技术的生物标志物分析方法，其特征在于，在步骤S5中，所述自定义半径范围为10~300μm。

6.根据权利要求5所述基于多重免疫组化技术的生物标志物分析方法，其特征在于，所述自定义半径为30μm。