[发明专利]一种检测新型冠状病毒的时间分辨荧光免疫试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种检测新型冠状病毒的时间分辨荧光免疫试剂盒及其制备方法，其中杂交瘤细胞株COVID19‑SRBD‑8，保藏编号为CCTCC No：C202167。该杂交瘤细胞制备得到的SARS‑CoV‑2 S1‑RBD单克隆抗体具有高度特异、灵敏度高、效价高等特性，其和市售新型冠状病毒单克隆抗体，能分别识别SARS‑CoV‑2S1‑RBD抗原的不同表位，两者在制备颗粒结合物和充当硝酸纤维素膜上的捕获剂方面具有良好的表现效果，基于其制备得到的试纸条实现了对常规样本中的新型冠状病毒定量检测，且重复性好、精密度强、灵敏度高，还发现其与核酸检测结果有很高的阴阳性符合率，预示其具有良好的临床应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种检测新型冠状病毒的时间分辨荧光免疫试剂盒及其制备方法。

背景技术

抗体的功能取决于其与抗原结合的表面位点。抗体因结合表面位点不同而发挥特定的功能，如激活或抑制活性。了解抗体识别位点有助于评价抗原检测的精准度。而丰富表面位点的对照抗体，也常用于疫苗效果评估。因此，筛选不同位点抗体，可应用于新型冠状病毒检测及疫苗保护效力评估等方面。

SARS-Cov-2属于单股正链RNA病毒，基因组分为非结构基因和结构基因。其中非结构基因含有两个开放阅读框（ORF1a和ORF1b），编码16个非结构蛋白（Nsp1到16），而结构基因则编码4个蛋白：S、E、M、N。

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)四种主要的结构蛋白：刺突蛋白（Spike protein，S蛋白），核衣壳蛋白（Nucleocapsid，N蛋白），膜蛋白（Membrane protein，M蛋白），包膜蛋白（Envelope protein，E蛋白）。新型冠状病毒刺突蛋白S蛋白有两个亚基：S1和S2，受体结合位点（RBD）位于S1亚基上。它以三聚体的形式组成病毒粒子外膜表面的刺突，其主要功能是识别宿主细胞表面受体，介导与宿主细胞的融合。

由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）引起的COVID-19大流行在世界各地肆虐，并造成数百万住院和死亡。全世界的政府和组织一直在史无前例地努力控制其进一步扩散并减轻其对人类生命和经济大屠杀的巨大破坏。需要有效地控制许多工具和策略的组合。最有效的方法之一是快速筛选，检测和隔离感染者。这种检测/隔离策略使得非常需要简单，便携式和低成本的检测工具来提供快速的结果，以便可以立即识别和隔离受感染的人。

关于SARS-CoV-2的检测和实验室测试方法的许多评论已经发表。当前有三种主要的检测方法已经在紧急使用授权下商业化。他们每个人都有自己的优点和局限性。最广泛使用的诊断检测方法是基于病毒核酸的检测，例如实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和环介导的等温扩增。一方面，它们是高度敏感和特异的，另一方面，它们通常很昂贵并且提供结果的速度很慢。在当前情况下，RT-PCR需要两到三天的周转时间。如果感染者继续从事某些类型的社交活动，并有可能在采样时间和检测结果报告之间将SARS-CoV-2传播给其他人，则这是不可接受的。对于非传染性场景的这种积极检测结果给受影响的人带来了不必要的负担。

血清抗体检测是另一种已广泛使用的检测。已经开发和发表了大量基于免疫色谱分析的快速血清学检测方法。他们不是检测SARS-CoV-2病毒的遗传特征，而是检测由对SARS-CoV-2的免疫应答产生的抗体。它们主要基于免疫测定，并且通常便宜且易于使用。它们对于筛查，跟踪和监视暴露于SARS-CoV-2的人员非常有用。通常，直到感染的相对晚期才在被感染的人中产生IgM或IgG抗体。IgM通常在受感染的人中出现较早，并随着IgG的增加而逐渐降低。这些血清学检测很可能为感染早期的人提供阴性结果。错误的负面结果会给人以错误的安全感，并可能导致结果扩散更大。