[发明专利]一种核酸免提取三重荧光RT-LAMP检测FCV、FPV及FHV-1病毒的试剂盒

说明书

本发明公开了一种核酸免提取三重荧光RT‑LAMP检测FCV、FPV及FHV‑1病毒的试剂盒。本发明利用LAMP技术建立一种敏感性高、特异性强和重复性好，不需要提取检测样本核酸，直接采用临床样本原液即可同时检测FCV、FPV、FHV‑1的RT‑LMAP检测方法，并研制快速检测试剂盒。本试验建立的核酸免提取三重荧光RT‑LAMP检测方法与研制的检测试剂盒具有良好的特异性及灵敏度，稳定性好，只使用热裂解临床样本原液而无需核酸提取，可在1h内完成对相关病原的检测，是临床快速检测FCV、FPV、FHV‑1的有效方法。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种核酸免提取三重荧光RT-LAMP检测FCV、FPV及FHV-1病毒的试剂盒。

背景技术

猫杯状病毒(Feline calicivirus，FCV)、猫细小病毒(Feline panleukopeniavirus，FPV)及猫疱疹病毒I型(Feline herpesvirus-1，FHV-1)是临床上危害猫科动物健康的三种主要传染性病毒，其传染性强，致死率高。它们常见的实验室检测方法主要有电镜观察、PCR、荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR，qPCR)、重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification，RPA)、酶联免疫吸附(Enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA)、胶体金免疫层析等。由于这些方法对实验器材及环境的要求较高、耗时长、成本高或易造成假阳性等缺点，难以在临床检测中广泛推广使用。

FCV、FPV与FHV-1这三种病原感染引发的疾病临床症状有相似之处，且与其他病毒、真菌、细菌或寄生虫等病原体之间常常发生混合交叉感染。当发生混合感染后根据常规的病原学调查分析及临床症状变化更难得到准确有效的诊断结果，容易导致错判误判，需要实验室技术进行鉴别诊断确诊。因此建立一种方便快捷、敏感性高、特异性强和重复性好的鉴别诊断方法，是临床中快速缉鉴别检测诊断FCV、FPV和FHV-1三种病原尚待解决的问题。

多重LAMP技术通过在一管反应体系中混合多对不同目的基因的特异性引物，实现了单管内多目的片段的同时扩增，改善了单重LAMP技术一次扩增反应中只能检测单种目的片段的缺点^[3]。多重LAMP技术不仅使扩增效率得到了有效的提高，并且在扩大检测领域范围的同时降低了检测成本。多重LAMP技术的发展趋势与运用领域逐渐增大，已成为国内外研究的一大热点。但由于多重LAMP反应体系中存在多种靶基因特异性引物，可能会产生引物间相互干扰或配对引起非特异性扩增反应而导致假阳性的发生。同时，不同目的基因引物浓度的高低对扩增反应效率的影响不同，因此在多重LAMP反应体系中各目的基因的引物并不是简单的混合，而是要对各引物浓度比例进行优化，以考察不同比例引物浓度对扩增效率的影响。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种用于三重荧光RT-LAMP检测FCV、FPV、FHV-1的引物和探针组合物。

本发明的另一目的是提供一种核酸免提取三重荧光RT-LAMP检测FCV、FPV及FHV-1病毒的试剂盒。

本发明的又一目的提供一种非疾病诊断目的的核酸免提取三重荧光RT-LAMP检测FCV、FPV、FHV-1的方法。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种用于三重荧光RT-LAMP检测FCV、FPV、FHV-1的引物和探针组合物，包含：