[发明专利]免疫检测载体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种免疫检测载体的制备方法，包括以下步骤：提供固相基材；将所述固相基材使用含有多巴胺盐和聚乙烯亚胺的第一溶液进行浸泡；将经过所述第一溶液浸泡的固相基材使用含有金属离子和有机配体的第二溶液进行浸泡，得到所述免疫检测载体。本发明的制备方法可以有效地提升传统固相基材的比表面积以及与抗体等生物分子的结合位点。MOF的三维和多孔结构进一步降低了材料表面大分子之间反应的空间位阻，从而增加了抗体等生物分子的反应活性，充分暴露其表位，提升检测信号及灵敏度。而且，MOF负载抗体等生物分子之后，能够较长期保护抗体等生物分子免于外部环境温度变化造成的活性降低等影响。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，特别是涉及一种免疫检测载体及其制备方法和应用。

背景技术

目前用于检测蛋白基生物标志物的技术包括酶联免疫吸附测定法(ELISA)、微流控法、免疫层析法、化学发光法等，主要是通过固相载体结合捕获对应的抗体，然后与样本中的待测抗原或标志物发生特异性免疫反应，实现抗原或标志物的检测。如传统ELISA法所用固相载体为96孔反应杯，材质为聚苯乙烯(PS)塑料；微流控法可用聚合物塑料(PS、PMMA、COP等)或玻璃形成微流道，在层流流道中实现微量样品的有效检测；免疫层析法则是以多孔硝化纤维素薄膜作为固相层析载体包被抗体；而化学发光法常常依靠微米磁珠作为固相载体表面来结合抗体，实现抗原标志物检测。而由于抗体/蛋白质本身对暴露温度和pH等环境变化的敏感性，基于以上市场主流的检测方法，固相表面结合抗体后，产品常常需要低温保存和运输。同时，传统ELISA等法还存在低灵敏度和检测限(LOD)等局限性。

因此，传统的免疫检测载体难以确保结合抗体的稳定性，也就无法降低免疫诊断产品的运输成本，免疫反应的灵敏度也较低。

发明内容

基于此，有必要提供一种能够提高结合抗体效力和稳定性，以及增强免疫反应灵敏度的免疫检测载体。

一种免疫检测载体的制备方法，其包括以下步骤：

提供固相基材；

将所述固相基材使用含有多巴胺盐和聚乙烯亚胺的第一溶液进行浸泡；

将经过所述第一溶液浸泡的固相基材使用第二溶液进行浸泡，得到所述免疫检测载体，所述第二溶液含有能形成金属有机框架材料的金属离子和有机配体。

在其中一个实施例中，在使用所述第二溶液进行浸泡之前，还包括以下步骤：将经过所述第一溶液浸泡的固相基材使用含有戊二醛的第三溶液进行浸泡。

在其中一个实施例中，所述第三溶液中，所述戊二醛的浓度为0.5wt％～1.5wt％。

在其中一个实施例中，所述第一溶液中，所述多巴胺盐的浓度为0.1wt％～1wt％，所述聚乙烯亚胺的浓度为0.1wt％～1wt％，所述聚乙烯亚胺的分子量为2000～75000Da。

在其中一个实施例中，所述第二溶液中，所述金属离子的摩尔浓度为0.001M～0.1M，所述有机配体的摩尔浓度为0.5M～2M。

在其中一个实施例中，所述金属离子源自对应金属的可溶性的硝酸盐、盐酸盐、硫酸盐和/或醋酸盐，所述金属离子为锌离子、铁离子、铜离子、锰离子、铝离子、镁离子、钾离子、镍离子和铬离子中的一种或多种。

在其中一个实施例中，所述有机配体为2-甲基咪唑、2-硝基咪唑、苯并咪唑、2-咪唑甲醛和4-甲基咪唑-5-甲醛中的一种或多种。

本发明还提供了一种免疫检测载体，其包括依次层叠的固相基材、多巴胺-聚乙烯亚胺层和金属有机框架材料层。

本发明还提供了一种免疫检测方法，其包括以下步骤：提供如上所述的免疫检测载体，加入抗体溶液进行孵育，然后使用封闭液进行封闭，洗涤后加入待测样本进行孵育。