[发明专利]一种基于透明质酸的双靶向功能因子递送体系的制备及其在炎症性肠病中的应用

说明书

本发明提供一种基于透明质酸的双靶向功能因子递送体系，其制备方法包括以(5‑羧基戊基)三苯基溴化膦修饰的原花青素为活性因子，合成的两亲性透明质酸为壁材，采用双重乳液反溶剂蒸发法制备双靶向原花青素递送体系。该体系在谷胱甘肽的刺激下能实现原花青素的释放，并在炎症部位和线粒体内实现双靶向递送体系的聚集；此外，该载运体系能有效改善或缓解炎症性肠病症状；本发明所使用原料成本低廉，包埋条件温和，易于规模化生产。

技术领域

本发明涉及纳米技术领域，更具体地说，涉及一种基于透明质酸的双靶向功能因子递送体系的制备及其在炎症性肠病中的应用。

背景技术

慢性结肠炎是一种较难治愈，患者需要长期服用药物的慢性疾病。为了减少口服药物引起的不良反应，研发利用食品功能性组分，通过口服结肠递送体系运送到结肠部位，来缓解炎性症状，是一种更为安全和有效的结肠炎处理策略。

原花青素作为一种活性因子，具有抗氧化、抗炎等生物活性，对结肠炎症具有潜在的预防和治疗作用。但原花青素对外界环境中的pH值、光、热和氧气等条件敏感，经口服进入消化道后也易受到体内pH值、酶、黏液等因素的影响，导致其稳定性和生物利用度降低。

透明质酸作为海洋生物资源中的主要活性成分，可用于口服结肠靶向递送体系壁材，以保护原花青素在上消化道的稳定性，并将其递送至结肠部位。由于透明质酸可与CD44受体特异性结合，以透明质酸作为壁材料制备纳米颗粒，可通过CD44受体介导的内吞作用促进巨噬细胞对递送体系的主动摄取。一旦进入细胞，就面临着被细胞质高黏度液体和大量酶分解的威胁。线粒体在维持肠上皮稳态中也很重要，线粒体自由基的产生和氧化应激损伤也参与了慢性结肠炎的发生，因此它可能是慢性结肠炎治疗的新的靶向细胞器。(5-羧基戊基)三苯基溴化膦作为一种离域亲脂阳离子，通常修饰在纳米颗粒表面或与活性成分共价连接实现线粒体靶向。因此，在巨噬细胞和线粒体中有效富集的双靶点纳米颗粒可能是治疗慢性结肠炎的有效策略。

发明内容

本发明的采用双重乳液反溶剂蒸发法提供一种基于透明质酸的双靶向功能因子递送体系的制备方法及其在炎症性肠病中的应用，以解决原花青素对外界环境中的pH值、光、热和氧气等条件敏感，经口服进入消化道后也易受到体内pH值、酶、黏液等因素的影响，导致其稳定性和生物利用度降低的问题。

为了实现上述目的，本发明提供一种基于透明质酸的双靶向功能因子递送体系，包括以(5-羧基戊基)三苯基溴化膦修饰的原花青素为活性因子，以两亲性透明质酸为壁材构建的双靶向原花青素递送体系。

一种基于透明质酸的双靶向功能因子递送体系的制备方法，包括如下步骤：

S1、将(5-羧基戊基)三苯基溴化膦溶解在二甲基亚砜中，配制成浓度为20mg/mL的溶液，然后加入N,N’-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶，室温下搅拌至激活(5-羧基戊基)三苯基溴化膦上的羧基；加入原花青素在室温黑暗中搅拌12～24h；结束后在二甲基亚砜中透析12～24h，在蒸馏水中透析24～48h，收集透析袋内溶液，冷冻干燥得到(5-羧基戊基)三苯基溴化膦修饰原花青素聚合物；

S2、将透明质酸溶解于蒸馏水中，加入1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，室温下搅拌1～2h，激活透明质酸上的羧基；再加入胱胺二盐酸盐搅拌12～24h；然后在蒸馏水中透析24～48h，收集透析袋内溶液，冷冻干燥后得到透明质酸-胱胺二盐酸盐；

S3、将硬脂酸溶解在乙醇溶液中，加入1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，冰水浴条件下搅拌1～2h；再加入10mg/mL透明质酸-胱胺二盐酸盐溶液，在80℃下搅拌4～8h，然后冷却到室温继续磁力搅拌12～24h；再在蒸馏水中透析24～48h，收集透析袋内溶液，冷冻干燥后得到透明质酸-胱胺二盐酸盐-硬脂酸聚合物；