[发明专利]一种基于非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的竞争性单克隆抗体、试剂盒及其应用

说明书

本公开提供了特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗原结合蛋白、抗体或活性片段，包括所述抗原结合蛋白、抗体或活性片段的非洲猪瘟病毒竞争ELISA检测试剂盒及其制备方法和应用。本公开的ELISA检测试剂盒生产方便，效果稳定，无非特异反应，包被量低，有利于试剂盒的大量生产；本公开所提供的非洲猪瘟病毒竞争ELISA方法具有快捷、灵敏、简便、特异等优点，在非洲猪瘟的临床检测中具有广泛的应用。

技术领域

本公开涉及生物技术领域，具体涉及一种基于非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的竞争性单克隆抗体、试剂盒及其应用。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是猪的一种烈性传染病，死亡率可以高达100％，由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染引起。非洲猪瘟病毒是目前已知唯一的DNA虫媒病毒，病毒有囊膜，多为血吸附阳性，能吸附猪红细胞形成特征性的红细胞花环，这与病毒编码的血吸附蛋白CD2v有关。

CD2v蛋白由EP402R基因编码，全长1083bp，它是由信号肽、跨膜区、胞内区和胞外两个免疫球蛋白样结构域组装而成的糖蛋白。其中，两个免疫球蛋白样结构域是红细胞的结合部位，与小鼠、大鼠和人的CD2分子具有一定的序列同源性。胞内区与细胞CD2分子无序列同源性，并且在不同ASFV毒株之间高度保守。CD2v蛋白为ASFV晚期表达蛋白，是ASFV的毒力因子和免疫逃避蛋白，因此是研制基因缺失苗的常用靶基因。

近年来已有很多关于CD2v缺失疫苗研究的报道，但是基因缺失疫苗存在着较大的安全隐患，其在使用过程中有可能会发生基因突变或重组从而导致新毒株的流行，因此急需建立针对CD2v基因的鉴别诊断研究方法。虽然大多感染ASFV康复猪的血吸附抑制抗体滴度都较低，但已有很多研究证明CD2v蛋白具有良好的免疫原性，可以用于ASF免疫血清学诊断试剂的制备与研究。例如周晓慧等利用原核表达载体pET-ELP获得了具有强免疫原性的重组CD2v抗原，并通过试验证明该抗原具有良好的检测特异性。钟秋平等成功表达了ASFVCD2vN-Fe蛋白，并证明了该蛋白具有良好的免疫原性。任肖等利用原核表达载体pET-28a表达了CD2v蛋白，并制备了多克隆抗体，为进一步研究CD2v蛋白的生物学功能奠定基础。

然而，现有基于CD2v蛋白的抗体的灵敏度和特异性仍然较差。

发明内容

本公开的目的是提供一种针对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的竞争性单克隆抗体，含所述单克隆抗体的竞争ELISA检测试剂及其检测试剂盒，以及所述检测试剂或检测试剂盒在检测非洲猪瘟病毒中的应用，以解决现有检测技术的弊端。

第一方面，本公开提供一种特异性结合非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的抗原结合蛋白，其中，所述抗原结合蛋白包含至少一个重链可变区和至少一个轻链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体；所述轻链可变区具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰获得的保守性变异体。

其中，SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列为：ESGSLIGDLGSLKLSGQSGLQLHVKPEVMLCATLVMAPFYRASGRLEWVATFTSYFWKEWSLGSMVSLRSEVKGRFAMYFGVRQTPEGAVPTSDINAKNTLGISRSLSCATEGGDLQMSDFSTGMSTVSYQVGFKV。

SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列为：QYNAEGKGDIQSWGTPASFLSTISLGHQRSNKAGLNIMTLSLKPHASEIKKSASAVEGTQEGVVTVTSLCQMWGSSCRAALQNSEPYISLFSSEYLAKSLSYYASKSVLGGPCITFRSYQAIQTGTTPYTFGGEYLVTQFEQDFYK。