[发明专利]一种无色杆菌及其应用与制备吩嗪-1-羧酸和吩嗪-1-甲酰胺的方法

权利要求书

1.一种无色杆菌，其特征在于：所述无色杆菌的分类命名为无色杆菌H6，已于2021年3月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：M2021262。

2.一种如权利要求1所述的无色杆菌的应用，其特征在于：用于发酵制备吩嗪-1-羧酸和吩嗪-1-甲酰胺。

3.一种如权利要求1所述的无色杆菌制备吩嗪-1-羧酸和吩嗪-1-甲酰胺的方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）制备无色杆菌 H6的发酵培养物，通过离心将发酵液和菌体分离开，取上清液按1:1(v/v)的比例加入丁酮萃取，萃取3-4次，静置后待其自然分层，丁酮萃取层经蒸馏浓缩后得到发酵粗提物，重复萃取3-4次，合并粗提物用离心浓缩仪冷冻抽提干燥后即得粗提浸膏；

2）将粗提浸膏用甲醇溶解后，上硅胶柱经硅胶柱层析，用氯仿/甲醇作为洗脱剂，从体积比100:0~0:100进行梯度洗脱，收集其中含有吩嗪-1-羧酸和吩嗪-1-甲酰胺的馏分，洗脱馏分再经半制备型HPLC制备分离，分离得到的组分经离心浓缩仪冷冻抽干，得到吩嗪-1-羧酸和吩嗪-1-甲酰胺。

4.如权利要求3所述的一种无色杆菌制备吩嗪-1-羧酸和吩嗪-1-甲酰胺的方法，其特征在于：所述步骤1）中无色杆菌 H6的发酵培养物的制备方法为：将过夜活化的无色杆菌H6接入种子培养基，置于28°C、120 rpm摇床过夜培养得种子液，将种子液以5%(v/v)的接种量接入到发酵培养基中，于28°C、120 rpm摇床培养到第三天时，收集发酵液制得发酵培养物。

5.如权利要求4所述的一种无色杆菌制备吩嗪-1-羧酸和吩嗪-1-甲酰胺的方法，其特征在于：所述种子培养基和发酵培养基的配方都为每升培养基中含有：NaCl 10 g，葡萄糖10 g，细菌学蛋白胨 5 g，酵母膏 5 g，MgSO₄·7H₂O 0.5 g，K₂HPO₄ 0.7 g，KH₂PO₄ 0.3 g，CaCl₂ 0.53 g，pH7.0。

6.如权利要求3所述的一种无色杆菌制备吩嗪-1-羧酸和吩嗪-1-甲酰胺的方法，其特征在于：所述步骤2）中所述HPLC的条件为：色谱柱为Agilent Ultimate XB-C18柱，流动相包括A相和B相，流动相A相：10%（v/v）的乙腈+0.08%（v/v）的甲酸，溶剂为水，流动B相：90%（v/v）的乙腈，溶剂为水；梯度洗脱程序：0~23min，流动相比例为A相/B相（v/v）：95:5~0:100；23~26min，流动相比例为A相/B相（v/v）：0:100；26~27min，流动相比例为A相/B相（v/v）：0:100~95:5；27~30min；流动相比例为A相/B相（v/v）：95:5，检测波长254 nm，流速1 mL/min。