[发明专利]一种快速检测多种呼吸道病原体的试剂盒及探针、引物组合

说明书

本发明公开了一种快速检测多种呼吸道病原体的试剂盒，主要基于熔解曲线技术，包括针对2019‑nCoV、FluA、FluB、H3N2、RSVA、RSVB、HRV、HAdV3、HAdV7、HMPV、MP的特异性引物和探针，本发明的快速检测多种呼吸道病原体的探针及引物组合物，采用非对称多重荧光定量PCR和熔解曲线相结合的技术，根据不同的靶基因分别设计特异性分子信标或Taqman探针，尤其是对2019‑nCoV进行多靶标同时检测，确保检测特异性的同时，避免了假阳性的出现。

技术领域：

本发明属于核酸检测技术领域，特别涉及一种快速检测多种呼吸道病原体的试剂盒及探针、引物组合，及其制备工艺。

背景技术：

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种检测新型冠状病毒（2019-nCoV）、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒A型、呼吸道合胞病毒B型、鼻病毒、H3N2、腺病毒3型、腺病毒7型、偏肺病毒、肺炎支原体的试剂盒及检测方法。

冠状病毒（Coronavirus，CoV）属巢状病毒目，冠状病毒科，主要通过直接接触分泌物或经气溶胶、飞沫传播，也有证据表明可经粪口途径传播。新型冠状病毒肺炎的临床表现为发热、乏力等全身症状，伴有干咳，呼吸困难等，可迅速发展为重症肺炎、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征，脓毒性休克，多器官功能衰竭，严重酸碱代谢紊乱等，甚至危及生命。

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，主要传播方式是空气飞沫传播。根据核蛋白（NP）和基质蛋白（M）不同分为甲、乙、丙、丁（或 A、 B、 C、 D）四型。甲型流感病毒根据病毒表面的血凝素（Hemagglutinin， HA）和神经氨酸酶（Neuraminidase， NA）的蛋白结构和基因特性，可分为多种亚型。目前发现的 HA 和 NA 分别有 18 个（H1-18）和 11 个（N1-11）亚型。甲型流感病毒最容易发生变异，容易引起爆发流行；乙型流感病毒变异较少，丙型流感病毒较稳定，多引起散发病例。流感典型症状以突然发热、头晕头痛、肌痛为特点，同时可伴有喉咙痛和咳嗽、鼻塞、流涕、胸痛、眼痛、畏光等症状。

呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus, RSV）属肺炎病毒属，根据其黏附蛋白 G 抗原性的不同，分为A型和B型，其A型和B型所引起的临床症状较为相似。RSV 是婴幼儿下呼吸道感杂的最主要病原体，2～6 个月发病率最高，潜伏期 3～7 日，症状较重，可有高热、鼻炎、咽炎及喉炎，之后表现为细支气管炎及肺炎。少数病儿可并发中耳炎、胸膜炎及心肌炎等。早产、先天性心脏病、肺发育不良等是致危的主要因素。RSV 感染不仅可诱发哮喘，而且与病情的加重有关。成人和年长儿童感染后，主要表现为上呼吸道感染。RSV通常在冬、春季节流行，并具有亚型分布差异。该病经空气飞沫和密切接触传播。

人鼻病毒（Human Rhinovirus,HRV）是单股正链的RNA病毒，属肠道病毒属，长约7.5kb，只有一个开放阅读框，有A、B、C三种血清型，多于150种基因型。主要引起上呼吸道感染，部分型别的HRV引起下呼吸道感染，特别是对婴幼儿、老人机免疫抑制的患者造成严重的疾病。HRV主要通过接触和飞沫传播，经鼻、口、眼粘膜进入体内。

人腺病毒（Human adenoviruses,HAdV）为DNA病毒，属腺病毒科。腺病毒肺炎约占社区获得性肺炎的4%-10%，重症肺炎以3型及7型多见，感染后一般会造成呼吸系统的不适。依感染不同血清型的腺病毒，可能会引起消化道不舒适、结膜炎、膀胱炎、起疹子等，其中腺病毒引起的呼吸道疾病和红眼病最为常见。主要经空气飞沫和密切接触传播。

人偏肺病毒（Human metapneumovirus,HMPV）是单股负链有包膜的RNA病毒，全长约13kb，包含8个基因开放阅读框，共编码9个蛋白。HMPV感染好发于婴幼儿，主要症状包括上呼吸道感染、毛细支气管炎、肺炎等，少数患儿并无临床症状。HMPV全年均可发病，多在晚冬、春季和夏季早期流行，通过呼吸道飞沫、手口、手眼接触污染物表面传播。