[发明专利]雷公藤的质量检测方法

权利要求书

1.一种雷公藤的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)混合对照品溶液的制备

精密称取雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲对照品适量，分别加甲醇制备成单一对照品储备液；精密吸取上述对照品储备液适量，混合后加甲醇稀释，最终制成雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲的混合对照品溶液；

步骤(2)供试品溶液的制备

取雷公藤或雷公藤制剂，精密加入醇类溶剂，提取，合并提取液，滤过，续滤液过微孔滤膜，制得供试品溶液；

步骤(3)线性回归方程的建立

取步骤(1)的混合对照品依次稀释5倍，得到系列浓度的对照品溶液，依次注入UPLC，以系列对照品浓度作为横坐标X，对应的峰面积为纵坐标Y，对各化学成分进行线性回归分析并计算线性回归方程；

步骤(4)含量测定

取步骤(2)的雷公藤供试品溶液注入UPLC进行分析，将峰面积代入步骤(3)的线性回归方程，计算供试品溶液中雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲的含量。

2.根据权利要求1所述的雷公藤的质量检测方法，其特征在于，

步骤(1)混合对照品溶液的制备

精密称取雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤吉碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤红素、雷公藤内酯甲对照品适量，分别加甲醇制备成单一对照品储备液；精密吸取上述对照品储备液适量，混合后加甲醇稀释，最终制成每1mL含雷公藤次碱0.013mg、雷公藤春碱0.2500mg、雷公藤吉碱0.1500mg、雷公藤甲素0.0006mg、雷公藤内酯酮0.0005mg、雷酚内酯0.00125mg、雷公藤红素0.0045mg、雷公藤内酯甲0.004mg的混合对照品溶液。

3.根据权利要求1所述的雷公藤的质量检测方法，其特征在于，步骤(2)供试品溶液的制备方法为：

取雷公藤或雷公藤制剂，精密加入6～12倍量的甲醇或乙醇，回流或超声提取2～3次，每次0.5～2小时，合并提取液，滤过，续滤液过微孔滤膜，制得供试品溶液。

4.根据权利要求1所述的雷公藤的质量检测方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中的UPLC的色谱条件为：

采用UPLCBEHC₁₈色谱柱，规格为100mm×2.1mm，1.7μm，流动相A相为乙腈-B相为水，梯度洗脱：；流速：0.4mL·min^-1，进样量1μL，柱温35℃，自动进样器温度10℃；

质谱条件为：

采用XevoTQ-XS质谱系统进行质谱检测，该系统配有ESI源，以正负模式进行检测，电离源条件设定为：毛细管电压3.0kV；脱溶温度400℃；锥气流量150L/h；脱溶气体流量为1000L/h。碰撞气体采用氩气；采用MRM模式进行检测和定量。

5.根据权利要求4所述的雷公藤的质量检测方法，其特征在于，梯度洗脱方式为：0～2.08min，A：30％～40％；2.08～4.17min，A：40％～49％；4.17～6.25min，A：49％～49％；6.25～7.29min，A：49％～55％；7.29～8.34min，A：55％～80％；8.34～9.38min，A：80％～85％；9.38～10.42min，A：85％～30％。

6.根据权利要求4所述的雷公藤的质量检测方法，其特征在于，8种化学成分的质谱检测参数如下：

7.根据权利要求1所述的雷公藤的质量检测方法，其特征在于，步骤(3)中建立的标准曲线为：