[发明专利]FAdV-4变异株和非变异株二重荧光LAMP引物组、试剂盒及应用在审
| 申请号： | 202110742934.2 | 申请日： | 2021-07-01 |
| 公开（公告）号： | CN113293237A | 公开（公告）日： | 2021-08-24 |
| 发明（设计）人： | 谢芝勋;栾勇娇;罗思思;谢丽基;谢志勤;李孟;邓显文;张艳芳;曾婷婷;黄娇玲;王盛;范晴;张民秀;李小凤;李丹;万丽军;韦悠;阮志华;任红玉 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广西南宁公平知识产权代理有限公司 45104 | 代理人： | 蓝文苑 |
| 地址： | 530001 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | fadv 变异 二重 荧光 lamp 引物 试剂盒 应用 | ||
1.FAdV-4变异株和非变异株的二重荧光LAMP的检测引物组，其特征在于，引物组包括如SEQ ID NO.1所示序列的引物1-1、如SEQ ID NO.2所示序列的引物1-2、如SEQ ID NO.3所示序列的引物1-3、如SEQ ID NO.4所示序列的引物1-4、如SEQ ID NO.5所示序列的引物1-5、如SEQ ID NO.6所示序列的引物1-6、如SEQ ID NO.7所示序列的探针引物1-7、如SEQ IDNO.8所示序列的引物2-1、如SEQ ID NO.9所示序列的引物2-2、如SEQ ID NO.10所示序列的引物2-3、如SEQ ID NO.11所示序列的引物2-4、如SEQ ID NO.12所示序列的引物2-5、如SEQID NO.13所示序列的引物2-6和如SEQ ID NO.14所示序列的探针引物2-7；
所述探针引物1-7的5’端有FAM基团、3’端有BHQ1基团，探针引物2-7的的5’端有CY5基团、3’端有BHQ2基团。
2.权利要求1所述的LAMP的检测引物组在LAMP扩增反应体系中的应用。
3.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述LAMP扩增反应体系为：1-4μL dNTPMix、2.5μL 10×Bst buffer、1μl Bst DNA聚合酶8U、0.5～2.5μLMgSO4溶液、5μL引物混合液、1μL探针引物预混液、2μL混合DNA模板，加水至25μL。
4.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述LAMP扩增反应体系中dNTP Mix终浓度为0.4mmol/L-1.6mmol/L，Bst DNA聚合酶8U终浓度为320U/mL，MgSO4终浓度为2mmol/L-10mmol/L，所述5μL引物混合液中，各条引物的终浓度为引物1-1和引物2-10.2μmol/L、引物1-2和引物2-2 0.2μmol/L、引物1-3和引物2-3 1.6μmol/L、引物1-4和引物2-4 1.6μmol/L、引物1-5和引物2-5 0.8μmol/L、引物1-6和引物2-6 0.8μmol/L，所述1μL探针引物预混液中，反应体系里终浓度为引物1-7 0.02～0.05μmol/L，引物2-7 0.02～0.05μmol/L。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述LAMP扩增反应条件为：在温度60℃反应40分钟，80℃作用5min灭活。
6.FAdV-4变异株和非变异株的二重荧光LAMP的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的LAMP的检测引物组。
7.权利要求1所述的LAMP的检测引物组在制备检测或辅助检测待测样品中是否含有FAdV-4变异株和非变异株的产品或制剂中的应用。
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